抗水稻纹枯病菌放线菌的筛选、鉴定和生物防治作用的初步研究

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1、密级——硕士学位论文抗水稻纹枯病茵放线茵的筛选、鉴定和生物防治作用的初步研究作者崔主鉴指导教师蓝垒蕉筮撞单位地址逝婆竺重堇盘鲎垡堂鱼生全盘堂堂瞳申请学位级别论文提交时间硕士2013．3．25论文答辩时间2Q1315119学位授予单位和日期逝姿旦重芷态堂2Q13生鱼月答辩委员会主席壑主坐丝撞论文评阅人——2013年3月25日DissertationSubmittedtoDissertattonSubmittedtoZhejiangNormalUniversityforMasterAPrelimina

2、ryStudyonExtraction，IdentifyandBiocontrolEffectsofStreptomyceshygroscopicusagainstRiceRhizoctoniasolaniCandidate：CuiYuhuiSupervisor：JiangDonghuaDiscipline：BotanyCollegeofChemistryandLifeScienceZhejiangNormalUniversity,Jinhua321004，Zhejiang抗水稻纹枯病菌放线菌的筛

3、选、鉴定和生物防治作用的初步研究摘要水稻纹枯病是水稻的主要病害之一，由立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)引起的。能够产生菌核结构，其具有抗逆性与耐极端环境的能力，因而菌核在病害的发生和传播过程中起着重要作用。由于菌核的特性，水稻纹枯病也成为生产上最难防治的病害之一。本研究首先从浙江省金华市郊区土壤中筛选获得一株抗水稻纹枯病菌的放线菌Sh．43菌株。经形态学、生理生化实验、16SrDNA序列比对与分析，鉴定为吸水链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)。生理生化实验

4、结果表明，Sh-43菌株对环境有较强的适应能力。其次，选取多种植物病原菌，测定Sh．43菌株的抗菌谱。实验结果表明：放线菌Sh．43菌株对真菌类的植物病原菌，有较好的拮抗效果；而对细菌类的病原菌总体拮抗效果较差。以水稻纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)菌株为指示菌，测定了Sh．43菌株发酵液的抑菌稳定性，试验结果表明：对于不同温度、普通光照和紫外光照的处理，Sh．43菌株发酵液均保持了稳定的抑菌能力；对不同的酸碱度，发酵液中的抑菌成分比较敏感，随着酸碱度的增加，抑菌能力下降显著。再次，

5、通过单因素实验得到可溶性淀粉为最优碳源，酵母膏为最优氮源，并在单因素的基础上对发酵培养基进行了正交实验优化，通过计算得到该菌株在可溶性淀粉30g、酵母粉1．5卧氯化钠0．5g、磷酸氢二钾0．25g、MgS040．5g、FeS04O．01g，蒸馏水1000mL，初始pH7．5，温度28。C，摇床转速200r／min，接种量3％，培养96h时活性最高，菌液的抑茵直径提高到30．76mnl。第四，研究测定了吸水链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)Sh．43菌株发酵液对水稻纹枯病的

6、生防效果。采用牙签嵌入法侵染4个水稻品种，并以方法l(保护措施)、方法2(治疗措施)、方法3(对照措施)分别处理水稻。结果表明：植株的相对病斑高率最大下降了30．17％，病情指数最大下降了29．58％，防效作用最高可达47．32％。对该试验研究中所采取的三种不同的处理方法比较发现，方法1较另两种处理方法防效更优，其防效作用主要体现为对植物病害的预防效果。这表明在防治水稻纹枯病过程中，预防比治疗更重要。T生塞垫茎最后，通过积累Sh．43菌株发酵液，按照萃取剂极性大小，选取四种有机溶剂依次萃取，检测各

7、萃取剂中物质的抑茵能力，得到了溶解于乙酸乙酯萃取剂中的粗提物；将该活性物质进行硅胶柱层析，检测各馏分的抑菌效果，得到了溶解于二氯甲烷中的相对较纯的有效物质；再通过LH．20凝胶柱层析，用甲醇洗脱，得到纯的抑菌成分。经比对该物质为2，3．butanediol(2，3．丁二醇)，分子式为C4Hl006。关键词：吸水链霉菌；鉴定；发酵优化；生防实验；分离纯化IIAPreliminaryStudyonExtraction，IdentifyBiocontrolEffectsofStreptomyceshyg

8、roscopagainstRiceRhizoctoniasolaniABSTRACTand●lcHsRhizoctoniasolaniisthephytopathogenofricesheathblight，whichisoneofthemostseriousricediseases．Rhizoctoniasolanicanproducesclerotium，whichCallputupWithreverse，evenextremeenvironmentalconditions．T