基于纳米材料荧光淬灭作用的microRNA检测新方法研究

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1、学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果。本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。学位论文作者签名：芦缸批日期：J．戊f学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可以采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文。学校可以向国家有关机关或机构

2、送交论文的电子和●．‘纸质文档，允许论文被查阅和借阅。(保密论文在解密后遵守此规定)保密论文注释：本学位论文属于保密论文，密级：——保密期限为——年。学位论文作者躲p饥日期：沙，J．厂指导教师签名：孑铱广日期：乒以．f中文摘要Micr0I矾As(111iI矾As)是一类长度为18．25个碱基的非编码小分子IⅢA。在生物体中，血鼢怆s通过与目标信使RNA(删5斟A)3’端非翻译区结合使得mI斟A降解或抑制其翻译，进而影响基因的表达。研究表明，癌症和肿瘤的发生及治疗过程中均伴随有llliI斟As的异常表达，因此，miI矾As可作为生物标志物用于癌症的诊断、预后及预测，

3、并可作为治疗靶点用于新型药物研究。发展可对其进行定性定量检测的检测方法成为基础生物医学研究中亟需解决的问题。本论文旨在建立针对111i心寸A的荧光检测新方法，为某些疾病的临床诊断提供快速、准确和灵敏的方法。本论文所建立的方法可准确检测细胞内nliI矾A表达量，在与111i砒蛆相关的癌症早期诊断中有潜在应用前景。主要内容如下：1．建立了一种基于金纳米粒子荧光淬灭作用的Inicr0砌叮A检测方法。该方法是将荧光指示分子FITC标记的发夹型DNA探针的3’端通过Au．S键固定在AllNPs表面，与目标序列进行杂交，根据杂交前后FITC荧光信号的变化进行检测。研究结果表明

4、，FITC荧光信号恢复的幅度与IIliR-122的浓度对数值在O．05．50pmo儿范围内呈线性关系，最低检测限为O．01pmo儿(S／N=3)。并且，该方法能灵敏地区分完全配对和单碱基错配的目标序列，具有良好的特异性选择能力，在单核苷酸多态性研究方面有潜在应用前景。另外还可准确可靠地检测实际样本中的删A含量，在生物医学研究和临床早期诊断中有潜在应用价值。2．发展了一种基于氧化石墨烯荧光淬灭作用的111icro鼢叮A检测方法。该方法中使用了一种包括用于与G0作用的结合区域(44nt)与用于与目标杂交的感应区域(22nt)的特殊单链DNA探针，探针吸附于GO表面，与

5、目标cDNA进行杂交，然后经限制性内切酶飚aI剪切，根据FAM荧光信号在剪切前后的变化进行检测。结果表明，剪切前后FAM的荧光强度变化值与目标cDNA浓度对数值在0．02pmo儿到100pmo儿范围内具有良好的线性关系，信噪比为3时最低检测限为5缸on，。并且，该方法能灵敏地区分完全配对和单碱基错配的目标序列，具有良好选择性。另外，该方法可以用于细胞中IIliR-126含量的快速检测，包括瑚州EC、H226、A549、H358、MCF-10A和MDA．MB231细胞等。该方法可避免由于非特异性吸附干扰物而产生虚假信号，有望用于快速检测组织和细胞中作为生物标志物的m

6、i砌悄含量，在生物医学研究和临床早期诊断中有潜在应用价值。关键词：而croRNA，荧光检测，金纳米粒子，氧化石墨烯，限制性内切酶AbstractAbStraCtMicr0鼢擒s(miRNAs)areagroupofsmallnoncod吨18-25nucleotide—long王心『AsWIlichcallregulatethegeneexpressionbycoInplemen』ta巧biIldiIlgtot11e3，-1衄：咖lsIatedregionsoftlleirtargetmessengerRNAs．Recently，a_berrantexpressi

7、onofm讧(NAsiscommolllyobservedillcanceriIlitiatioIl，oncogenesis，alldtuⅡ10rrespoIlseto仃ea衄ent，thereforemiRNAsemergeastissue-Specificbiomarkersfordia印osisaIldprognosisandaStargetsfornewdmgdisc0Ve巧．TheemcientuSeofmiRNA-biom酞erreqmrespreciseanalysisofmiRNAs，sotheaimofttlisthesisistodeVelop

8、arapi