高产多糖白灵菇菌株的诱变选育及其多糖的研究

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1、沈阳农业大学博士学位论文高产多糖白灵菇菌株的诱变选育及其多糖的研究姓名：马淑凤申请学位级别：博士专业：食品科学指导教师：刘长江20060615沈阳农业大学博士学位论文摘要自灵菇(P如“mf“sM6阳出ns曲)，隶属担子菌亚门(Basidiomycolina)，层菌纲(Hymenomyceles)，伞菌目(Agariates)，侧耳科(P1eurotaceae)，侧耳属俨』P“阳f甜)。它是一种食药价值很高的大型真菌，其生物活性物质有效组分一食药用真菌多糖的含量很高。白灵菇在液态深层发酵培养过程中也可产生真菌多糖即胞内多糖和胞外多糖，但产量较低。本课题研究了白

2、灵菇多糖高产菌的诱变选育、发酵条件及其活性多糖的提取、分离纯化、结构和活性功能。主要研究内容和结论如下：1．性能良好的出发菌株是获得高产量微生物代谢产物的基础，因此本论文对收集到的5株白灵菇菌株即JZ、JT、Fz、FB和PJ进行初筛。主要以PDA固体培养基和液体培养基(不加琼脂的PDA)为营养源，以生物量和胞外多糖产量为筛选目标对该5株菌株进行自然筛选比较。在固体培养基上Fz、FB和PJ3株菌株，暗白色，菌丝稀疏，不整齐，生长慢，易污染；而JZ、JT线性生长速度快、菌落洁白色，菌丝粗壮，长势旺盛；将在固体培养基上生长快的Jz、JT进行液体培养，其中Jz生长略

3、快于JT，而且生物量多糖均略高于JT。确定以JZ作为出发菌株。2．采用酶解白灵菇菌丝体得到的原生质体作为诱变材料，通过紫外线，He—Ne激光单一和复合方法对白灵菇Jz的原生质体进行反复诱变，筛选出生命力旺盛且适合于液态发酵培养的和适于栽培的白灵菇突变株JZ—FHl6。在未优化条件下进行液体培养，Jz．FHl6比出发菌株的生物量提高10．93％，胞外多糖产量提高16．22％。经验证，菌株Jz—FHl6的遗传性能稳定。3．通过单因素试验、Plackett—BullI】an试验和响应面分析试验对胞内多糖和胞外多糖的发酵培养基进行了优化，分别得到胞内多糖(A)和胞外

4、多糖(B)最佳培养基配方：A：豆粕粉2．419／L、Mgs04·7H200．48班、麸皮5．58盯。、玉米淀粉+葡萄糖41．08∥L、KH2P0429／L、VBl10mg／L；B：豆粕粉1．879／L、Mgs04·7H20O．70∥L、麸皮2．05g／L、玉米淀粉+葡萄糖48．39／L、KH2P042∥L、VBIlOm∥L。通过单因素试验对胞内多糖和胞外多糖的发酵工艺条件进行了优化，分别确定了较优的胞内多糖(c)发酵工艺参数和胞外多糖的发酵工艺参数(D)：C：发酵温度26℃、初始pH值6、接种量15％、装料量20％、摇床转速160r／min、发酵周期8d；D

5、：发酵温度26℃、初始pH值6、接种量10％、装料量20％、摇床转速160r，min、发酵周期8d。摘要在上述优化条件下进行发酵试验，分别得到白灵菇菌株Jz．FHl6的生物量、胞内多糖产量和胞外多糖产量为29．49／L、1．34班、2．98∥L，比初始条件下的20．199几、098∥L、2．15∥L、分别提高了45．62％、36．73％、38．6％。4．对菌株Jz—FHl6的子实体和菌丝体的营养成分进行全面分析。研究结果为：白灵菇子实体、菌丝体中的氨基酸总量和必需氨基酸占总氮比例远高于FAO标准模式，均含有8种必需氨基酸：白灵菇菌丝体的必需氨基指数、生物价、

6、营养指数比子实体高。子实体和菌丝体的总脂肪酸中不饱和脂肪酸含量分别高达82．5％和75．1％。子实体与菌丝体中铁、锌、钾、钠等矿物质含量大体相同，其中富含人体易缺乏的必需微量元素铁、镁、锌等，菌丝体中的钙、镁、锰含量远高于子实体。5．采用通用旋转组合设计试验法分别对热水法提取白灵菇子实体多糖PNFP和菌丝体多糖PNMP的工艺参数进行研究，得到PNFP(A)和PNMP(B)的最佳提取工艺条件为：A：提取时间5．4h，液固比67．8倍，提取温度98．4℃；B：提取时间3．8h、液固比52．5倍、提取温度95℃。在此条件下进行验证试验，得到PNFP和PNMP的得率

7、分别为9．93％和6．39％。采用正交回归旋转组合设计试验法分别对酶解法提取PNFP和PNMP的工艺参数进行研究，得到PNFP(C)和PNMP(D)的最佳提取工艺条件为：c：酶用量3．06％，酶解温度44。9℃，酶解时间3，8h，pH值6，7：D：酶用量2．53％、酶解温度39．6℃、酶解时间3．2h、pH值7．2。在此条件下进行验证试验，得到PNFP和PNMP的得率分别为12．37％和8．23％。酶解法比热水法提取白灵菇子实体中的多糖得率提高了24．57％，酶解法比热水法提取白灵菇菌丝体中的多糖得率提高了28．79％。采用b(34)正交试验进行白灵菇胞外多

8、糖(PNEP)工艺参数研究，得到PNEP的最佳提取工