白灵菇液体发酵及其胞外多糖生物活性的研究

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1、摘要白灵菇是一种珍贵的食药两用真菌，其多糖具有抗肿瘤、抗衰老、改善免疫系统功能等功效。本文对白灵菇菌株的液体深层发酵工艺、菌丝体成分、胞外多糖提取方法、胞外多糖的分离纯化、理化性质以及生物活性进行了较系统的研究，为白灵菇发酵产品的开发奠定基础。以获取较高菌丝生物量为目的，通过正交试验，确定白灵菇的最适液体发酵培养基的组成为：玉米粉3．O％、葡萄糖1．O％、酵母粉0．1％、黄豆粉2．O％、KH2P04O．3％、MgS04’7H200+1％、CaS040．1％。在摇瓶培养条件试验中研究pH值、装液量、接种量、摇床转速等因素对生物量

2、的影响。结果表明最佳的摇瓶培养条件为：起始pH值6．5、装液量80ml／250ml、接种量10％、摇床转速160rpm，发酵周期为6d。在摇瓶培养试验的基础上，进行发酵罐发酵试验，结果表明：利用5L发酵罐，在通气量(v／v)为1：0．5、搅拌速度为100r／min、装液量为3L，温度25±1℃条件下，菌丝生物量达到2．9Ig／100ml。对自灵菇液体发酵的菌丝体与子实体成分分析，结果表明：发酵菌丝体和予实体的甲醇提取物，经紫外扫描所得的峰形大致相同，均在210nm和260nm处有较强的吸收峰，两者在成分上相似。发酵菌丝体在氨基

3、酸组成上与子实体一致，且菌丝体氨基酸总量、必需氨基酸总量均明显高于子实体。胞外多糖提取的最佳工艺路线为：将离一th,除去菌丝体的发酵液pH调至6．0，60"C下浓缩至原体积的1／2，冷却后加入预冷的95％乙醇至终浓度75％，4"C冰箱静置至少24h。5000rpm离心收集沉淀，沉淀经无水乙醇、丙酮反复洗涤，得粗多糖。用sevag试剂除去蛋白，低压真空浓缩至小体积，透析除去小分子，真空冷冻干燥，得精制多糖。然后经DEAE-DE52和SephadexG一100层析柱，得多糖纯品，其多糖含量为90。5％，气相色谱分析表明：多糖由D．

4、半乳糖、D．葡萄糖、D．甘露糖、D．木糖、D．阿拉伯糖等组成，摩尔比为2．448：1．466：0．684：0．700：0．586。分子量为2．79×105，红外光谱测得其为B．型吡哺糖。通过体内和体外试验对白灵菇胞外多糖生物活性进行研究，结果表明：胞外多糖具有较强的清除自由基能力，抑制·OH所致小鼠肝组织MDA生成和肝线粒体肿胀，在浓度为lmg／rnl时就达到极显著的水平(P

5、在体内和体外都具有较强的生物活性。关键词：白灵菇液体发酵菌丝体胞外多糖分离纯化生物活性StudiesonliquidfermentationofPleurotusnebrodensisandbioactivitiesofexopolysaccharidesAbstractPleurotusnebrodensisisakindofedibleandmedicalfungus．PolysaccharidesfromPleurotusnebrodensispossessawidevineryofphysiologicalactivi

6、ties，suchasantintmour,anti-aging，immunomodulating，etc．Inthispaper,astudywascarriedoutonthesubmergedfermentationprocess，activesubstancesofmyeeliaofPleurotusnebrodensis，extractionandpurificationofexopolysaccharides，andphysicalandchemicalpropeaiesofexopolysaccharidesfr

7、omPleurotusnebrodensis．Thebiologicalactivitiesofexopolysaccharideswerealsostudied．Byorthogonaltest，theoptimummediumcompositionhadbeenobtained．ItWasasfollows：glucose1．0％，cornpowder3．O％，yeastextract0．1％，soybeanpowder2．O％，KH2P040．3％，MgS04·7H200．1％，CaS040．1％．Alsotheeffe

8、ctsofpH，mediumcapacity，inoculationquantity，shakingfrequencyonthemyceliagrowthwerestudied．Theoptimumshakingcultureconditionwasasfollows：ini