HPLC法测定5个产地斑蝥药材中斑蝥素的含量

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1、HPLC法测定5个产地斑蝥药材中斑蝥素的含量【摘要】目的：测定不同产地斑蝥药材体内不同形态斑蝥素的含量。方法：运用高效液相色谱法测定5个产地斑蝥游离斑蝥素和总斑蝥素的含量。用氯仿提取游离斑蝥素，酸水解提取总斑蝥素。结果：加酸提取后斑蝥中斑蝥素含量显著升高;不同产地斑蝥药材中游离斑蝥素含量接近，平均含量为1.01%，总斑蝥素含量为游离斑蝥素的1.85倍。结论：酸水解处理后斑蝥素提取率升高，总斑蝥素更能反映药材毒效与质量。【关键词】斑蝥;游离斑蝥素;总斑蝥素;高效液相[ABSTRACT]Objective：Todeterminethecontentsofcant

2、haridinindifferentexistingformsofMylabrisfromdifferentareas.Methods：ThetotalcantharidinobtainedbyacidolysismethodandthefreecantharidinobtainedbydirectextractionmethodweredeterminedinMylabrisfromfivedifferentareasbyHPLC.Results：ThecontentofcantharidininMylabriswasincreasedsignifican

3、tlyafterextractionwithacid.ThecontentsoffreecantharidinweresimilarinMylabrisfromdifferentproducingareas，averagedas1.01%.Thecontentoftotalcantharidinwas1.85timeshigherthanthefreeone.Conclusions：Theextractionrateofcantharidinincreasesafterusingtheacidolysismethod.Totalcantharidincanr

4、eflectthetoxicologicaleffectandqualityofMylabris.[KEYWORDS]Mylabris;Freecantharidin;Totalcantharidin;HPLC斑蝥(Mylabris)为芫菁科斑芫菁属昆虫南方大斑蝥MylabrisphalerataPallas或黄黑小斑蝥MylabriscichoriiLinnaeus的干燥体。主产我国长江流域及以南各省区。药用始载于《神农本草经》，距今已有2000多年的应用历史，为《中国药典》常用有毒中药。性寒，味辛，有大毒，具有破血消癥、攻毒蚀疮、引赤发泡的功效[1]。近

5、年来广泛用于肿瘤病、肝炎及皮肤病的治疗。斑蝥素(Cantharidin)既是其抗肿瘤、抗病毒有效成分，亦是其主要毒性成分。本文采用GC/MS法对不同产地南方大斑蝥水解产物进行了分析，表明不同产地斑蝥药材化学成分组成及其含量有较大差异，其主要成分斑蝥素含量高低相差3.79倍[2,3]。同剂量药材由于斑蝥素含量的差异可能导致临床疗效与毒性的不确定性，若使用不当易引起不良反应[4]。为了进一步确证不同产地斑蝥药材不同形态斑蝥素含量，指导临床安全用药，本研究以游离斑蝥素和总斑蝥素为指标，采用HPLC法对全国5个主要产地2种斑蝥药材进行了比较分析与评价。1　仪器与试药

6、1.1　仪器Agilent1200高效液相色谱仪(DAD检测器)，AY220电子天平(日本SHIMADZU公司);Sartorius电子分析天平(赛多利斯科学仪器);离心机(上海兰科仪器有限公司);超声清洗器KQ-100(昆山市超声仪器有限公司);DK-S22型电热恒温水浴锅(上海精密实验设备有限公司)。1.2　试药斑蝥素对照品(自制，纯度98%);斑蝥药材购自安徽铜陵中药饮片有限公司，产地为：广西、安徽、河南、湖南和湖北。净制处理后按品种分类，经陈建伟教授鉴定为南方大斑蝥MylabrisphalerataPallas和黄黑小斑蝥Mylabriscichor

7、iiLinnaeus的干燥体;甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。2　方法与结果2.1　色谱条件C18柱(4.6mm×250　mm,5μm);流动相为甲醇：水(30∶70);检测波长：230nm;流速：1.0mL?min-1;柱温：30℃;进样量：10μL;在此条件下，样品中斑蝥素峰与杂质峰的分离良好。见图1,2。图1　斑蝥素对照品HPLC图谱图2　斑蝥药材HPLC图谱2.2　对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，加甲醇制成每1mL含2.031mg的溶液，作为对照品溶液。2.3　供试品溶液的制备取斑蝥虫体，于50℃干燥6h，粉碎，

8、过60目筛，于干燥器中保存备用。本实验采用2种方法制