卵巢癌抗独特型抗体6B11scFv和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白的构建和表达

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1、卵巢癌抗独特型抗体6B11scFv和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白的构建和表达中华妇产科杂志1999年第7期第34卷论著作者：杨飞雪　钱和年　黄华梁　冯捷　崔恒单位：杨飞雪　钱和年　冯捷　崔恒　北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心　100034；黄华梁　中国科学院遗传所关键词：重组融合蛋白质类；抗体；抗独特型；粒细胞巨噬细胞集落刺激因子；卵巢肿瘤　　【摘要】　目的　构建和表达模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体6B11scFv和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)的融合蛋白,以提高抗独特型抗体的免疫原性

2、,为进一步用于卵巢癌的免疫治疗提供基础。方法　采用基因工程技术，用编码连接肽的DNA连接6B11scFv和hGM-CSFcDNA，并对大肠杆菌用温度进行诱导表达；采用蛋白免疫吸附印迹法，对表达的蛋白进行活性测定。结果　表达的蛋白能分别与6B11的初始抗体和小鼠抗hGM-CSF单克隆抗体特异结合。结论　表达的融合蛋白保留了6B11scFv和hGM-CSF两种成分的活性，增强了6B11scFv的免疫原性。TheConstructionandExpressionof6B11scFvAnti-idiotypicAntibod

3、yandHumanGranulocyte-macrophage-colonyStimulatingFactorinEscherichiaColiYANGFeixue,QIANHenian,HUANGHualiang,etal.GynecologicOncologyCenter,People′sHospital,BejingMedicalUniversity,Beijing100034　　【Abstract】　Objective　Toenhancetheantigenicityofananti-idiotypicsin

4、glechainantibody6B11mimickingovariancancerantigen.Methods　UsingDNArecombinanttechnique,arecombinantfusionproteinexpressionvectorwasconstructed.Thisvectorlinked6B11scFvcDNAandhumanGM-CSFwithalinker.ProteinproductionswereinducedwiththetemperaturechangeinE.Coliand

5、analyzedwithwesternblot.Results　Theexpressedfusionproteincanbereactedwithbothanti-humanantibodyandCOC166-9(AB1of6B11).ConclusionTherecombinantfusionproteinkeepstheactivitiesofbothcomponentsandmaybeusedastumorvaccineforovariancancer.　　【Keywords】　Recombinantfusio

6、nproteins　　Antibodies,anti-idiotypic　　Granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor　　Ovarianneoplasms　　肿瘤的主动免疫治疗，越来越多的受到关注。但目前对肿瘤特异性抗原了解的并不多，而机体对肿瘤相关抗原往往处于免疫耐受状态。抗独特型抗体能够模拟外来抗原，并且能够打破机体的免疫耐受，作为肿瘤疫苗，已有用于肿瘤治疗的报道，并取得了良好疗效［1-3］，具有良好的应用前景。但由于抗独特型抗体只模拟抗原的单个表位，引起的免疫反

7、应容量小，免疫原性弱。而且目前常用的单克隆抗体是鼠源性，其缺点是由于种属特异性，反复用于人体可导致产生人抗鼠抗体，严重时可出现类似血清病样反应，限制了其在临床的应用。北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心(妇科肿瘤中心)制备了模拟卵巢浆液性乳头状囊腺癌抗原的抗独特型抗体6B11和6B11单链抗体6B11scFv［4,5］。为了进一步提高单链抗体表达原，我们构建了单链抗体和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)融合蛋白，以增强6B11scFv的免疫原性,为用作肿瘤疫苗提供基础。　　材料和方法　　一、质粒和菌株　　质

8、粒pCANTAB5E-6B11scFv为妇科肿瘤中心构建，含6B11scFvcDNA［4］；质粒PBV221-GM-CSF由中国科学院微生物所丘并生研究员提供，内含hGM-CSFcDNA；表达载体pKpL-3a及大肠杆菌pop2136由北京医科大学马大龙教授提供；质粒pUC18购自北京华美生物制品公司。　　二、限制性内切酶和工具酶　　内切酶Nc