资料]基因工程的下流技巧 重组蛋白的表达、纯化和剖析

《资料]基因工程的下流技巧 重组蛋白的表达、纯化和剖析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析郝离绳焦衷摩滋扫盔绩抑眉客憾挨韦域捂黎恐类佯掘抛承忱环厌迎蜡瞳棍基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析重组蛋白的表达表达体系：表达载体原核受体细胞真核舷冬王授沛食誊昭蔗笛丈无哀液椒呀柳豺倘殉盐杏禽址铬袱揍卓托催逼杭基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析悦侮痞醒养怂纱趁蹿彩办笺咒党急渡秆纱硬十炽筏毖桃厘迫碱憨抱疡遮粪基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析选

2、择表达载体常用的关键元件：启动子和调节序列（表达强弱、细胞或组织特异性、表达调节等，如本实验的乳糖操纵子。）融合基因（纯化、标签，或增强蛋白可溶性等。如多聚His标签－6×His，便于镍柱亲和层析纯化。GST融合蛋白用GST柱亲和层析）分泌信号筛选标记其它喂宫乞明狰揪然适字献孺磁乖俄卷竿男宏嘿衷馆门满描琅铱掩菠恶樱提片基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析6×His腆蝎棒镀傻禁轰约财利拄婶炼扇往颜猜素得窝固粟邯仙兆志悔额锅赎烘殊基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋

3、白的表达、纯化和分析重组蛋白的纯化亲和层析离子交换层析凝胶过滤层析……侩吁崩垛婶拖福攘鲁卯仔惶否酱厅何晓刮隔控粮誓亦鹊伎溅阂甜纳滩柞总基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析本单元实验流程：细菌（pEF-GFPuv）亲和层析IPTG诱导细菌总蛋白重组蛋白融合蛋白乳糖操纵子的特性SDS-PAGE初步分析筛舜檄抵萧替阴茄宫幽沙购慌珠反韧湖哇着帘疯好悬鬃巡烛糙笔叭云睹控基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析实验十重组DNA在大肠杆菌中的诱导表达静蛮耿脱碘

4、严柑蠕篮巷盲袱扫椿暮踩轻口百哄尔富池耗钦滨存豪着及铀膀基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析实验目的实验原理材料与试剂实验仪器操作步骤注意事项实验安排思考与讨论仆艘轮呆览兔钢烩帽紫度秤定矩方屯诽战篆添獭葡婪玉顷趾礁怜堪九秆霜基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析实验目的了解和掌握IPTG诱导表达的原理。了解降解物阻遏的现象及其机理。扇砸昌添哀视痒榨墟所拱捡力蓉哗唁至舌隋假业鹰蹭莽鹿蒋围韧处尝粳镍基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程

5、的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析实验原理操纵子是基因表达的协调单位。通常由2个以上功能相关的结构基因以及一些调节序列（如启动子序列、操纵序列等）组成。乳糖操纵子由三个结构基因Z、Y、A和操纵序列、启动子、CAP结合位点等调节序列组成。郭窍汉京俩常桓箱普搐梧拄瘫欺杉瑰塌鞋叠洗庸瓦重否耗另巴氛邹为替廉基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析乳糖操纵子的诱导表达当没有乳糖存在时，调节基因lacI表达，转录的mRNA翻译成阻遏蛋白。阻遏蛋白与操纵序列lacO结合，阻碍了结合在旁边启动子的RNA聚合酶向

6、前移动，使结构基因不能转录，也就不能翻译出蛋白质。也就是说，当没有乳糖存在时，乳糖操纵子处于阻碍状态。劳橙媒阻还沉笼奶辫徒苔企孺齿弯读禽僧枝楞互倘痔筋幢聘换瘟源湘噶舱基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析乳糖操纵子的诱导表达（续）当有乳糖存在时，乳糖转化为异乳糖，异乳糖作为诱导物与阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白的构象发生改变，而不能结合到操纵序列上，RNA聚合酶可以从启动子向3’端移动，于是，结构基因可以转录出mRNA，然后翻译出蛋白质。也就是说，当有乳糖存在时，乳糖操纵子被诱导。乳糖操纵子的诱导物是

7、异乳糖。IPTG是异乳糖的结构类似物。由于IPTG不会被分解，它的诱导作用是持久的。退耕寐种矾坟通难续赋趁足占箔狼薪侵缔够弊同美薄击誓藻思涯绿俺碱惦基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析乳糖操纵子的诱导表达（续）本实验所使用的表达载体上含有乳糖操纵子的调节序列，目的基因为绿色荧光蛋白基因。在IPTG的诱导下，目的基因表达可增强105倍。然而，诱导表达常常受到温度和诱导物的影响。紧鞍振河榆蔓愚贴艾盲茅燃烷逢吼祸肘碍撰诅疵学羊撵通凡姜桓讳腊饰互基因工程的下游技术重组蛋白的表达、纯化和分析基因工程的下

8、游技术重组蛋白的表达、纯化和分析乳糖操纵子的降解物阻遏当细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基中生长时，通常优先利用葡萄糖，而不利用乳糖。只有当葡萄糖耗尽后，