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《紫外_可见分光光度法在植物多糖含量测定中的应用_苏玉顺》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第28卷,第3期光谱实验室Vol.28,No.32011年5月ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryMay,2011紫外-可见分光光度法在植物多糖含量①测定中的应用②a,ba,b苏玉顺李艳君赵方振周婷婷范国荣(第二军医大学生物技术本科2008级上海市翔殷路800号200433)a(第二军医大学药学院药物分析学教研室上海市国和路325号200433)b[上海市药物(中药)代谢重点实验室上海市国和路325号200433]摘要紫外-可见分光光度法(UV-Vis)是目前国内比较常
2、见的一种光谱学测量方法。且近年来,其在植物多糖含量测定领域的应用越来越多。本文从UV-Vis测定植物多糖含量过程中的显色剂选取、各种条件的优化以及具体应用等方面进行综述。关键词紫外-可见分光光度法;植物多糖;综述中图分类号:O657.32文献标识码:A文章编号:1004-8138(2011)03-1101-071引言[1—5][6]多糖是各种植物中的重要有效成分,具有抗氧化损伤、抗肿瘤、抗癌抗菌、免疫调节、抗[7]炎症等多种生物活性作用。植物多糖含量的测定对植物资源开发利用,尤其是中草药产业的发展提供了技术支
3、持,在药物和食品加工业具有重要意义。随着研究的不断深入,植物多糖的含量测定方法越来越多。其中常见的方法包括化学滴定法、色谱法、光谱法等多种方法。然而化学滴定法步骤繁琐,重复性、准确度差,且实验操作的细微偏差对结果影响很大,而色谱法定性能力较差、分析能力受限于检测器、购置与使用费用偏高、需消耗有机溶剂。紫外-可见分光光度法(UV-Vis)是近年来应用于多糖含量测定最为广泛的方法。它是依据Lambert-beer定律,利用物质分子对200—760nm内电磁波的吸收特性建立起的光谱分析方法,以其较高的灵敏度和准确度
4、,操作快捷,仪器设备简单且适合于植物多糖的含量测定等优点受到广大研究者的关注。本文就近几年紫外-可见分光光度法在各种植物多糖含量测定中的应用及其研究进展进行综述。2显色剂的选择利用UV-Vis测定多糖含量的方式很多,包括根据糖的还原性测定3,5-二硝基水杨酸比色法和Somogyi-Nelson法。目前,国内测定植物中多糖含量主要是利用多糖在浓硫酸作用下迅速脱水成糠醛或羟甲基糠醛,再由酚类、芳胺类等检测剂与之反应,生成具有特定颜色的有机化合物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比。根据显色剂的不同,已知的显
5、色方法有苯酚-硫酸法、蒽①国家自然科学基金资助项目(No.30801541)②联系人,电话:(021)81871261;E-mail:ting0618@tom.com;tianmufan@sina.com作者简介:苏玉顺(1990—),男,河北省沧州市人,在读本科,主要从事多糖分离分析研究工作。收稿日期:2010-08-10;接受日期:2010-09-021102光谱实验室第28卷酮-硫酸法、地衣酚-硫酸法、咔唑-硫酸法等。由于咔唑有剧毒,故前3种方法比较常用。本文主要就前3种方法加以介绍。2.1苯酚-硫酸法
6、苯酚-硫酸比色法主要用于甲基化的糖、戊糖、寡糖类以及多聚糖的测定,甚至可以用于糖肽和糖蛋白的测定。此法优势在于可以进行大量样品的测定,实验时基本不受蛋白质存在的影响,且产[8]生的有色化合物在120min内颜色稳定。从目前各种文献资料来看,苯酚硫酸法测定的最大吸收波长多在480—491nm范围内,而实际应用时会因为水解出单糖种类的不同而出现偏差,如螺旋藻[9]多糖中含有鼠李糖、半乳糖、甘露糖、核糖等成分,最大吸收波长在480nm处;茯苓多糖水解后得[10][11]木糖、核糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖,
7、最大吸收波长于490nm处。杨春等指出苯酚暴露于空气中或在日光下被氧化逐渐变成粉红色,故应进行沙浴回流,用棕色瓶子收集馏出液,得到纯净苯酚。实验用苯酚溶液(未加硫酸)为现配溶液,并且每次用苯酚浓度一致,否则将会影响实[12]验结果。苯酚液配制时,需按比例加入一定量的铝片和碳酸氢钠蒸馏,所得馏分再加蒸馏水配[13]得。[14]NgD等利用屈光鉴别诊断指数法(DRI)对豆科植物中的半乳甘露聚糖含量进行了测定,结果显示与传统的苯酚-硫酸法(0.01—0.2mg/mL)相比,DRI(0.1—1.6mg/mL)具有更大
8、的检测范围,且降低了样品溶液所需的稀释度,减小了测量误差,故DRI具有更广泛的应用。2.2蒽酮-硫酸法蒽酮-硫酸法测多糖含量,特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用蒽酮法可以一次测出总量,省去许多麻烦,因此,有特殊的应用价值。同时,苯酚有毒性,为致癌物质,且对某些多糖可能诱导发生副
