循环免疫复合物测定

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1、实验三循环免疫复合物测定临床检验免疫学教研室目的1.掌握循环免疫复合物测定原理2.熟悉循环免疫复合物检测的临床意义免疫复合物(immunecomplex，IC)抗原抗体复合物，在正常情况下，机体防御系统作为清除异物抗原的一种方式，清除体内免疫复合物对机体有利。原理在某些情况下，体内形成的免疫复合物不能被及时清除，沉积在机体某一部位称为局部免疫复合物，游离于体液中称为可溶性免疫复合物，随血液循环的免疫复合物称循环免疫复合物(circulatingimmunecomplex，CIC)。免疫复合物沉积可引起多种疾病。原理聚乙二醇比浊法聚乙二醇(polye

2、thyleneglycol，PEG)是非离子型亲水剂，为乙二醇的聚合物。分子式HO(CH2CHO)nH，有较强脱水作用，破坏蛋白质表面的水化层和电子云，用于沉淀蛋白质，沉淀具有选择性。在pH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的PEG浓度越小。血清中加入终浓度为3％～5％的聚乙二醇，能相对选择性地沉淀免疫复合物。PEG还可抑制CIC解离，促进CIC进一步聚合成更大的凝聚物，使溶液浊度增加。用分光光度计测定浊度，可反映CIC含量。不能进行抗原特异性免疫复合物的测定，故仅适用于免疫复合物的粗筛材料硼酸缓冲液4.1％聚乙二醇(PEG)溶液微

3、量加样器、试管等分光光度计、普通冰箱待检血清不同CIC含量血清可由临床筛选获得，不宜冻融操作步骤样品稀释（0.2ml血清+0.4ml硼酸缓冲液）测A495nm值,硼酸缓冲液调零表1PEG比浊法测CIC方法测定管对照管稀释血清（ml）0.40.44.1%PEG（ml）4.0－pH8.4硼酸缓冲液（ml）－4.0按表1加样混匀4℃冰箱lh室温10～15min结果判断待测血清浊度值=（测定管吸光度-对照管吸光度）×100以大于正常人浊度值的均值加2个标准差为CIC阳性大于或等于8.3为CIC阳性注意事项低密度脂蛋白可引起浊度增加，应空腹采血，高γ球蛋白血

4、症和标本反复冻融也可引起浊度增加。2％PEG只能沉淀较大分子，4％PEG能沉淀较小分子的循环免疫复合物，大于5％PEG，选择性沉淀循环免疫复合物特性消失；当温度4℃时，循环免疫复合物沉淀最佳，室温每升高1℃，A值就下降0.02临床意义不是疾病诊断的主要指标，但在发病机制研究，了解病情进展，判断治疗效果方面能提供有意义的帮助对有蛋白尿、关节痛、血管炎、浆膜炎、紫癜症状且诊断不明确的病人，可考虑检测循环免疫复合物思考题试分析循环免疫复合物测定实验过程中有何因素将影响实验结果？采取什么措施保证实验的准确性？