灯盏花根腐病

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1、英特尔大书房开启一站式检索时代大数据（BigData）云计算（Cloud）移动性（Mobility）其他（Others）8期杜宾等：云南灯盏花根腐病病原初步鉴定1831南和广西等高山和亚高山开阔山坡草地和林缘地区。始载于《滇南本草》[1]，民间的使用已有600年的历史。性味辛、微苦、温，具有散寒解表，祛风除湿，活络止痛的作用。可以抑制蛋白激酶Ｃ的激活，防治神经元缺血性损失。通过降低缺血脑组织内中性粒细胞的粘附浸润对脑缺血有保护作用。灯盏花制剂自20世纪70年代开始应用于临床上，主要用于治疗高血压、脑栓塞、多发性神经炎、慢性视网膜炎及意外所致的瘫痪症，被临床称为“脑血管疾病的

2、特效药”，1977年被列入《中华人民共和国药典》中，是云南省“十五”期间重点培育的五大“云药”系列特色产品之一。灯盏花原为野生，随着市场对灯盏花及其制剂需求量的剧增和可观的经济效益，近年来开始了人工大面积栽培[2~6]。但是随着灯盏花人工栽培规模的不断扩大，根腐病的危害也逐年加重，已经成为制约其大规模生产的主要因素之一。【前人研究进展】该病害目前在国内外尚未见报道。【本研究的切入点】确定引起灯盏花根腐病的病原物，为制定高效、安全的防治措施提供依据。【拟解决的关键问题】通过对灯盏花根腐病的症状进行观察、描述，对其病原物进行分离、培养和鉴定。1材料与方法1.1供试灯盏花种源云南

3、生物谷灯盏花药业有限公司昆明栽培基地种植的灯盏花，是从云南省文山州邱北县采集，经过3年驯化栽培的种源。1.2病原菌的分离采集发病灯盏花植株的根，从病健交界处切取长约2～3mm的一段，用75%的酒精浸泡5～6s，再在0.1%的酸性升汞溶液中处理3～5s，然后在灭菌水中漂洗3次，将其移置在马铃薯琼脂培养基（PDA）上培养，挑取所出现的菌落移置在斜面PDA培养基上，然后在显微镜下进行单孢分离，保存备用[7]。1.3病原菌的鉴定将单孢分离物在标准培养基上培养，得到其纯培养物。观察其在PDA培养基上的培养性状、质地、色泽等。在显微镜下观察检测，测量大、小两型分生孢子的形态、大小、分隔

4、数和产孢结构，以及厚垣孢子的有无、形态和着生方式。1.4田间接种在云南农业大学实验农场种植灯盏花，分布在3个不同试验点，每点1500株苗。用无菌水冲洗培养7d的菌落，制成孢子悬浮液（5×106个孢子/ml）。灌根前用剪刀刺破健康植株的根部，每株浇灌10ml孢子悬浮液。每个试验点随机接种5株，3个点共接种15株。每个点随机取5株采用同样的方法灌入清水，作为对照。接种的灯盏花均为生长健康旺盛的植株。1.5接种后病情调查接种14d后，将接种植株及对照全部挖出，用自来水将根部的泥土冲干净后，按以下分级标准记载发病情况：0级：根系健康，完全无病；1级：仅有少许根系受伤，枯死面积小于1

5、0%；3级：根系受伤明显，枯死面积小于25%；5级：根系枯死面积25%～50%；7级：根系枯死面积50%～75%；9级：根系枯死面积大于75%。1.6致病菌的再分离取接种发病的灯盏花植株的根部，按照1.2的方法分离病原物，在PDA培养平板上获得纯培养，并与原接种菌株相比较。2结果与分析2.1灯盏花根腐病症状描述该病原菌主要侵染灯盏花的根部和茎基部，发病初期植株地上部分不表现任何症状，但随着病情的发展，维管束被破坏，失去输水功能，开始时叶片在中午阳光强烈时萎蔫，晚上即可恢复，以后便渐渐萎蔫死亡，最终导致整株干枯。观察发病植株的根部，已部分或完全变成深黑褐色（图1），用刀片切开

6、，可以明显看到其维管束组织变为黑褐色。2.2接种结果接种的15株灯盏花植株中，根部全部出现腐烂症状，其中严重度为1级的有4株，3级的有3株，5级的有4株，7级的有2株，9级的有2株，发病率达100%。对照植株的根部生长健康，发病率为0（表1，图2）。2.3病原菌的鉴定分离得到的单个分生孢子在标准培养基上生长四天后，菌落直径是3.54cm（pH6.5，27℃），初生为白色，后为红色和红褐色，气生菌丝发达，棉絮状。无性繁殖产生大、小两型分生孢子，大型分生孢子较少，5～8d产生，镰刀状，1～3个分隔，39～51×4～5.2µm；小型分生孢子1～2d就可以产生，并且产生1832中国

7、农业科学40卷a：健康植株地上部分；b：发病初期地上部分；c：发病后期地上部分；d：左发病后期根部；右健康植株根部a:Leafofhealthyplant;b:Leafofsickplantinearlyperiod;c:Leafofsickplantinlaterperiod;d:Left:Rootofsickplant;Right:Rootofhealthplant图1灯盏花根腐病田间自然发病症状Fig.1SymptomofE.brevlscapusrootrotinfield表1接种后14d灯盏花根腐病的发病