病毒感染的检查方法与防治原则

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1、病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒病毒抗原病毒核酸病毒酶类：如逆转录酶电镜直接观察光镜检查包含体分离培养一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：1.标本用“双抗”或两性霉素B处理2.低温保存，尽快送检3.血清学诊断采双份血清二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养细胞培养（cellculture）鸡胚接种（egginoculation）动物接种（animalinoculation）二、病毒的分离与鉴定一般程序：标本无菌处理动物接种鸡胚培养细胞培养指标阳性指标阴性病毒鉴定盲传2-3代指标阴性病毒阴性（一）病毒

2、的分离培养1.细胞培养单层细胞培养（monolayercellculture）分类悬浮细胞培养（suspendedcellculture）原代细胞（primarycell）细胞种类二倍体细胞（diploidcell）传代细胞系（continuouscellline）病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养组织组织块分散的单个细胞单层细胞剪碎培养基(原代细胞)单层细胞(次代细胞)传代培养蛋白酶特点：①对多种病毒敏感②生长能力有限,获取成本高③可携带潜伏病毒1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养(2)二倍体细胞培养体外分裂50～100代仍

3、保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。特点：①对多种病毒敏感②不带异种蛋白(人源性)③不带病毒，无致瘤潜能④可传50代左右1.细胞培养(3)传代细胞培养特点：①对多种病毒敏感性高②繁殖能力高，传代时间长③有致癌危险，不能用于疫苗生产1.细胞培养2.鸡胚培养采用孵化9～14天的鸡胚绒毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人类疱疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接种部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分离卵黄囊（yolksac）嗜神经病毒2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操

4、作程序复杂3.动物接种应用：尚无敏感细胞的病毒培养动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒1．病毒增殖鉴定(1)细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE）①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒的鉴定①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞②

5、形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)③形成包涵体(inclusionbody)(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋红细胞表面HA受体(3)干扰现象（interference）风疹病毒＋胚肾细胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)—风疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—风疹病毒(-)埃可病毒(+)(4)细胞代谢改变细胞代谢

6、变慢pH变化减慢2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大3.病毒血清学鉴定鉴定病毒种、型、亚型(1)血凝抑制试验（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型与亚型鉴定病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集（血凝抑制试验）(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）——多种病毒鉴定(3)凝胶免疫扩散试验(gelimmuno-diffusiontest)——多种病毒鉴定3.病毒血清学鉴定4.病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定核酸扩

7、增核酸杂交基因芯片基因测序（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死病毒）2.蚀斑形成试验（plaqueformationtest）3.50％组织细胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）感染性病毒量(四)新病毒的鉴定核酸类型的测定理化性状的检测形态学鉴定血清学鉴定基因测序和生物对比三、病毒感染的血清学诊断应用：①采取标本分离病毒为时已晚②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒③为证实所分离的病毒的临床意义④进行血清流行病学调查等1.中和试验（neutralizingtest）病毒＋中和抗体病毒

8、失去感染性特点：特异性高，抗体维持时间