小鼠VEGF ELISA kit说明书

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1、MouseVEGFELISAKIT目录号规格CMK001996TestsCMK001948Tests—_________________________________________________________________(本试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中天然和重组VEGF浓度，供科研使用。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分,若有任何疑问请与北京嘉美纽诺生物科技有限公司联系，您将得到我们的技术支持。简介：VEGF是刺激血管内皮细胞增殖和移行的重要因子，并可影响血管的通透性，因此也称为血管通透因子(VPF)。VEGF(VPF)是一个

2、具有高度保守性，由两个相同亚基(Mr23000)以二硫键交联结合成的二聚体糖蛋白。VEGF有四种不同变异体，在人类细胞中其氨基酸残基数为121，165，189及206。这四种变异是由于mRNA剪接差异所至，其中121，165个氨基酸残基者易至靶细胞，而余者多在细胞外基质中。其基因定位于第六对染色体长臂，包括交替剪接的8个外显子和7个内含子，这几型VEGF生物活性相近，但单体无生物活性。VEGF189及VEGF206与肝素结合力强而VEGF121于肝素结合力弱，VEGF165则介乎其间，这也是为什么VEGF189及VEGF206主要分布于细胞外基质中的缘故。研究证实血

3、管内皮细胞生长因子（VEGF）与血管生成关系密切，在临床上与肿瘤病人的进展及复发有关。检测原理:本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗小鼠VEGF单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的VEGF会与单抗结合，游离的成分被洗去。加入生物素化的抗小鼠VEGF抗体和辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合；抗小鼠VEGF抗体与结合在单抗上的小鼠VEGF结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色剂，若反应孔中有VEGF，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在450nm处测OD值，VEGF浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中V

4、EGF浓度。标本收集:1.收集血液的试管应为无热原和内毒素试管。2.血浆抗凝剂推荐EDTA。3.避免溶血，高血脂标本。4.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。5.标本收集后若不及时检测，请按一次用量分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。6.可根据实际情况，将标本做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。注：正常小鼠血清或血浆样本建议做1：2稀释。试剂盒组成:1a标准品2/1支(冻干)*4℃1b标准品和标本稀释液1瓶4℃2a浓缩生物素化抗体2/1支*4℃2b生物素化抗体稀释液1瓶4℃3a浓缩酶结合物2/1支*4℃(避光)3b酶结合物稀释液1瓶4℃4浓缩洗涤液20×1

5、瓶4℃显色剂1瓶4℃(避光)终止液1瓶4℃抗体包被板条8×12或8×6*4℃封板胶纸3/2张*说明书1份*:[96/48Tests]所需物品(不提供，但可协助购买):1.酶标仪(450nm)2.高精度加液器及吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000ul3.37℃温箱,双蒸水或去离子水，坐标纸。注意事项:1.试剂盒保存在2-8℃，除复溶后的标准品，其他成分不可冻结。2.浓缩生物素化抗体(2a)、浓缩酶结合物(3a)装量极少，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或离心处理，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。3.从冰

6、箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,这属于正常现象，加热使结晶完全溶解后再配制。4.若重复使用标准品应按照一次用量分装后，将其放在-20～-70℃贮存。一次性使用，避免反复冻融。5.不同批号的试剂盒组份不能混用。6.充分混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应过程中每10分钟手工混匀一次。7.在试验中标准品和样本检测时建议作双复孔或三复孔。检测前准备工作:1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温。2.将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:20)。未用完的放回4℃。3.标准品:加入标准品/标本稀释液(1b)1.0ml至冻干标准

7、品(1a)中，待彻底溶解后，静置15分钟混匀(浓度为2000pg/ml)。(建议标准曲线使用以下浓度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8、0pg/ml,)。复溶标准品若未用完请放入-20℃保存,稀释的标准品不得重复使用。4.生物素化抗体工作液：以生物素化抗体稀释液(2b)稀释浓缩生物素化抗体(2a)(1:100)。最好当日使用。5.酶结合物工作液：以酶结合物稀释液(3b)稀释浓缩酶结合物(3a)(1:100)。最好当日使用。标准品稀释方法：洗涤方法:1.自动洗板机：要求注入的洗涤液为350ul，注入与吸出间隔15－30秒