小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA Kit

《小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA Kit》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：E0478m预期应用ELISA法定量测定小鼠血清、血浆或其它相关液体中心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)含量。概述心肌钙蛋白Ⅰ（CardiacTroponinⅠ，CTnⅠ）作为心肌损伤的新的标志物，由于其高度的心肌特异性，高度敏感性及其较长的诊断窗口期，CTnⅠ已被广泛应用于临床。CTnⅠ在正常人血中含量极少，不易检测到。而在心肌损伤后4～8小时在外周血中逐渐增高，其浓度最高出现在12～24小时左右。在心肌损伤后7～10天外周血中仍可检测到CTnⅠ

2、。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中cTn-Ⅰ水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入cTn-Ⅰ抗原、生物素化的抗小鼠cTn-Ⅰ抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的cTn-Ⅰ呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上

3、，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,000pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml，15.6pg/ml，7.8pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制500pg/ml标准品：取0.5ml1,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。2.样品稀释液：1×20ml/瓶。3.检测稀释液A：1×10ml/瓶。4.检测稀释液B：1×10ml

4、/瓶。5.检测溶液A：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。6.检测溶液B：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。7.底物溶液：1×10ml/瓶。8.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。9.终止液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。标本的采集及

5、保存1.细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。2.血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。3.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。

6、如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100ul（取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。3.温育60分钟后

7、，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100ul，37℃，60分钟。5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。6.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。7.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入

8、顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。注：1.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2