资源描述：
《放射性碘-131标记酪氨酸》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第27卷第4期摇摇大学化学Vol.27No.4摇摇2012年8月UNIVERSITYCHEMISTRYAug.2012*放射性碘鄄131标记酪氨酸**李泽军摇褚泰伟(北京大学化学与分子工程学院摇北京100871)摇摇摘要摇以氯氨鄄T、Iodogen为氧化剂,用放射性碘鄄131标记酪氨酸分子。研究不同标记条件,如:溶液pH、底物浓度、氧化剂用量、载体加入量对标记率的影响。将本实验用在本科生综合化学实验课教学工作中。摇摇关键词摇放射化学摇碘鄄131摇酪氨酸摇综合化学实验摇摇目前,放射性标记技术已经被广泛应用于化学、生
2、物学和医学等领域,例如化学反应机理的研究、放射性免疫分析以及疾病的早期诊断和治疗等。因此,在本科生综合化学实验中开展与放射化学相关的实验,让学生掌握该学科的基本知识和操作常识,是有意义的。摇摇放射性碘鄄131具有半衰期短(8.02天),价格便宜,易于购买等优点。放射性碘标记化合物在生物学和医学中应用很广泛,是常用的示踪手段之一。常用的标记方法为利用氧化剂,如氯氨鄄T(Chlora鄄mine鄄T)、Iodogen、溴代琥珀酰亚胺(NBS)等将放射性碘负离子氧化为具有亲电活性的放射性碘,这些放[1鄄5]射性碘进而和化
3、合物中的苯环发生亲电取代反应以完成标记。酪氨酸分子中有被羟基取代的苯环,易于发生亲电取代反应,易于被碘标记。如欲对蛋白质或其他化合物进行碘标记,需先将酪氨酸及其衍[6]生物与蛋白质或其他化合物偶联,然后再完成放射性碘的标记。本实验利用氯氨鄄T、Iodogen为氧化131-剂,氧化碘鄄131负离子(I)标记酪氨酸分子。研究了不同的标记条件,如:溶液pH、底物浓度、氧化剂用量、载体加入量对标记率的影响,从而寻找最佳标记条件。通过该实验,学生可以初步掌握放射性碘标记化合物的常用方法,同时训练放射化学操作的基本技能。1摇
4、实验目的摇摇(1)了解放射性碘标记化合物的原理;摇摇(2)了解放射性碘标记化合物的两种常用实验技术与方法;摇摇(3)了解不同标记条件对标记率的影响。2摇实验原理摇摇氯氨鄄T和Iodogen是碘标记化合物常用的氧化剂,其分子结构如图1所示。氯氨鄄T是水溶性的,在-水溶液中生成HOCl,将放射性I氧化为放射性的I,放射性的I进而和化合物的苯环发生亲电取代反22[3]应,制得碘标记化合物。Iodogen标记化合物的原理和氯氨鄄T一致,但Iodogen不溶于水,标记化合物[7鄄8]时可以减少与水溶性有机分子的接触从而减少
5、其氧化损伤,所以氧化条件较为温和。氯氨鄄T氧化标记法和Iodogen氧化标记法是碘标记化合物常用的两种方法。摇摇酪氨酸由于分子内部有被羟基活化了的苯环,碘的亲电取代反应很容易在羟基的邻位发生。因此,很容易被碘标记成功。其反应式如图2所示。*基金资助:北京大学2011年实验教学改革经费(北京大学实验室与设备管理部)**通讯联系人,E鄄mail:twchu@pku.edu.cn52大学化学第27卷摇图1摇两种常用氧化剂的分子结构图2摇放射性碘鄄131标记酪氨酸分子131-摇摇本实验采取纸上色谱法来确定标记率。由于碘标
6、记的酪氨酸分子和未被标记上的I性质不同,它们在固定相和流动相(展开剂)之间的分配比不同。因此,在流动相展开过程中,被标记的酪氨酸分131-子和未被标记上的I随溶剂的移动速度不同而被分离开,放射性被分布于纸带的不同区域。标记率即为标记化合物区域的放射性活度占整条纸带的放射性活度的百分比。3摇实验试剂和仪器131摇摇无载体NaI溶液(原子高科股份有限公司),酪氨酸(上海康捷生物科技发展有限公司),氯氨鄄T(ACROSORGANICS),Iodogen(Sigma),甲醇(分析纯),正丁醇(分析纯),冰醋酸(分析纯),
7、NaSO(分225析纯),去离子水,85%磷酸(分析纯),KOH(分析纯),氯仿(分析纯),色谱用滤纸(宽1.5cm,长25.0cm),玻璃展开缸,FT鄄603井型酌闪烁探头和FH463A鄄自动定标器(中核(北京)核仪器厂)。4摇实验步骤4.1摇溶液配制和原料准备摇摇(1)0.1mol/LKOH水溶液用85%的磷酸溶液调pH=3、5、7、9、11。摇摇(2)将酪氨酸分别溶于pH3~11的KOH鄄HPO溶液中,质量浓度为0.2mg/mL。34摇摇(3)将酪氨酸溶于pH7的KOH鄄HPO溶液中,质量浓度分别为0.05
8、、0.1、0.15、0.2、0.3mg/mL。34摇摇(4)配制氯氨鄄T水溶液,质量浓度分别为0、1、2、3、4mg/mL。摇摇(5)配制Iodogen的氯仿溶液,质量浓度分别为0、0.02、0.04、0.06、0.08mg/mL。分别取0.5mL上述溶液于离心管中,在通风橱中挥发干氯仿,Iodogen被涂于离心管内壁,制得不同Iodogen含量的离心管若干。摇摇(6)配
