甲醇对胰蛋白酶催化活性影响的机理研究

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1、第14卷第4期生命科学研究Vo1．14No．42010年8月IJifeScienceResearchAug．2010甲醇对胰蛋白酶催化活性影响的机理研究宋翼行，黎春怡，黄卓烈，郭诗静，巫光宏，，何平·(1．华南农业大学生命科学学院，中国广东广州510642；2．茂名职业技术学院化工系，中国广东茂名525000)摘要：为了探索甲醇影响胰蛋白酶催化活性的作用机理，将胰蛋白酶纯化到电泳纯的水平，用纯酶进行了催化动力学研究；测定了酶分子的紫外吸收光谱、紫外差示光谱和荧光发射光谱的变化．试验结果表明：胰蛋白酶经7％甲醇处理时，其比活力比对照提高了l7．97％．经甲醇处理后的胰蛋白酶，其动力学

2、参数K值及～值均得到提高，且提高幅度比较大．甲醇处理后，酶的紫外吸收光谱基本没有变化．其差示光谱出现明显的正峰和负峰，而其荧光发射光谱也基本不变，只是荧光强度有所增加．实验结果证明，在7％甲醇存在下．胰蛋白酶分子构型不变，酶活性的变化是甲醇引起酶分子构象改变的结果．关键词：甲醇；胰蛋白酶；动力学：光谱分析中图分类号：Q55文献标识码：A文章编号：1007—7847(2010)04—031l一05StudyontheEffectsofCarbinolSolventsonTrypsinActivitySONGYi—hang，LIChun．yi，一，HUANGZhuo—lie，GUOSh

3、i-jing，WUGuang—hong．HEPing(1．CollegeofLifeSciences，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，Guangdong，China；2．MaomingVocationalandTechnicalCollege，Maoming525000，Guangdong，China)Abstract：Inordertofindthemechanismoftrypsinincarbinolsolution，thetrypsinwaspurifiedtoelectrophoresispurity．Th

4、epurifiedenzymewasusedtotestthecatalytickinetics，theultravioletabsorptionspectrum，thedifferentialultravioletspectrum，aswellasthefluorescentemissionspectrumoftheenzyme．Itwasindicatedthatthespecificactivityoftrypsinin7％carbinolsolutionincreasedby17．97％．Whentrypsinwastreatedwithcarbinol，bothKandw

5、ereincreased．Aftertreatingwithcarbinol，theultravioletabsorptionspectrumandthefluorescenceemissionspectrumofenzymewerealmostunchanged．Butthedifferentialultravioletspectrumshowedfaintnegativeandpositivepeaks．Theresultsshowedthatthechangeoftheactivityoftrypsinin7％carbinolsolutionwasnottheresultso

6、ftheconfigulationchangebuttheconformationchangeoftheenzyme．Keywords：carbinol；trypsin；kineticsanalysis；spectrumanalysis(，J／reScienceResearch，2010，14(4)：311～315)胰蛋白酶是动物来源的一种蛋白水解酶，分蛋白胨制备、蛋白质的序列分析、多肽的酶促合子质量为23800，易溶于水，具有较好的热稳定成以及亲和吸附分离等方面显示出广泛的应用性，临床上可用于抗炎症和消化药物的复配，工前景．以往普遍认为，酶只有在水溶液里才能业上可用于皮革加工和生

7、丝处理．近年来，该酶维持催化活性结构，有机合成常用到的有机溶剂还在酒类和饮料的澄清、畜血蛋白质的水解、胰常常使酶变性或失活．但也有研究结果表明，酶收稿日期：2010—04．10；修回日期：2010—06．17基金项目：国家自然科学基金资助项目(10074016)作者简介：宋翼行(1985一)，女，广东汕头人，硕士研究生，主要从事酶学和蛋白质研究；通讯作者：黄卓烈(1950-)，男，广东廉江人，华南农业大学生命科学学院教授，博士生导师，主要从事酶学、酶工程和蛋白质研究，