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《白腐真菌总DNA提取方法的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第26卷第4期生物学杂志Vol126No142009年8月JOURNALOFBIOLOGYAug,2009do:i10.3969/.jissn.1008-9632,2009.04.082白腐真菌总DNA提取方法的研究昂莎莎,荚荣,卢伟(安徽大学生命科学学院,合肥230039)摘要:白腐真菌的巨大而广谱的生物降解能力使其在/三废0治理和环境修复中具有良好的应用前景。为寻求一种简便有效的白腐真菌总DNA的提取方法,在实验中分别采用蜗牛酶法、CTAB法、SDS法和蛋白酶K法进行操作,且对提取的DNA进行紫外吸收光谱和
2、琼脂糖凝胶电泳(AGE)检测。通过对提取的总DNA浓度、纯度、实验操作过程以及试验成本等方面的比较与分析,得出蜗牛酶法是白腐真菌总DNA提取的理想方法。关键词:白腐真菌;总DNA;蜗牛酶法;CTAB法;SDS法;蛋白酶K法中图分类号:Q523文献标识码:B文章编号:1008-9632(2009)04-0082-04白腐真菌(White-rotfungi)多属担子菌纲(Basidio-PDA固体培养基(1L):200g土豆煮沸浸出液,20gmycetes),寄生或腐生在树木或木材上,能降解木质素、蔗糖,25g琼脂
3、。纤维素,它是整个碳素循环的中心,是目前已知的唯一CPDA液体培养基(1L):200g土豆煮沸浸出液,[1,2]能在纯系培养中将木质素彻底矿化的一类微生物。20g蔗糖,3g磷酸二氢钾,1.5g硫酸镁,2mL维生素B1目前已发现它可对各种有毒害、难降解的化合物具有溶液(0.1g/L)。[3]广谱、高效、低耗、适应性强的生物降解能力。近年1.2缓冲液来,由于白腐真菌生物降解的巨大潜能和独特的降解缓冲液1:0.9mol/Lsorbito,l0.1mol/LEDTA,pH机制引发了国内外许多学者对与其降解活动相关的生值
4、8.0;缓冲液2:50mmol/LTris,20mmol/LEDTA,pH物学、生物化学及分子生物学等方面进行深入研值8.0;TE缓冲液:10mmol/LTris,1mmol/LEDTA,pH[4~8]究。而白腐真菌的生理活动极其复杂,在合适的值8.0;提取缓冲液:50mmol/LTris-HCl(pH值8.0),培养条件下,菌丝生长旺盛,菌丝常为多核,对其菌丝50mmol/LEDTA(pH值8.0),1.4mol/LNaC,l3%体总DNA提取方法的研究是探索白腐真菌生物学机CTAB,3%PVP40;TENS
5、缓冲液:50mmol/LTris-HCl制和对其进行能动改造的基础和前提,提取的DNA质(pH值8.0),100mmol/LEDTA(pH值8.0),50mmol/L量也直接影响后续的研究工作。本实验室已分离得到NaC,l1%SDS;裂解缓冲液:10mmol/LTris-HCl(pH值一株产锰过氧化物酶的白腐真菌)))裂褶菌F178.0),20mmol/LEDTA(pH值8.0),0.4mmol/LNaC,l(Schizophyllumsp.F17),该菌对偶氮、蒽醌、三苯甲烷0.5%SDS。和杂环等不同结构类
6、型的多种合成染料显示出较强的氯仿-异戊醇:VBV=24B1[9~11]脱色能力,具有潜在的应用价值。本实验以该菌酚-氯仿-异戊醇:VBVBV=25B24B1为研究对象,分别采用4种方法即蜗牛酶法、CTAB法、1@TAE:40mmol/LTris碱,20mmol/L乙酸,1mmol/SDS法和蛋白酶K法对裂褶菌F17进行总DNA的提LEDTA,pH值8.0取,且对提取的DNA进行浓度、纯度等方面分析,以期1.3菌体培养和收集得到一种实用、有效的白腐真菌总DNA的提取方法。将裂褶菌F17接种于PDA固体斜面培养基,
7、28e1材料和方法培养7d。用无菌水洗下斜面上的菌丝,匀浆器2000r/1.1菌种、培养基min匀浆3次,每次5s,制得菌悬液。裂褶菌F17(Schizophyllumsp.F17)由本实验室筛在盛有200mLCPDA液体培养基的三角瓶中,接入选并保存。10mL菌悬液,28e130r/min摇床培养3d。离心收集菌球,置于冷冻干燥机内冻干,液氮研磨成均匀粉末。收发日期:2008-07-08;修回日期:2008-07-161.4总DNA提取方法作者简介:昂莎莎(1986-),女,硕士研究生;[12]通讯作者:荚荣
8、,E-mai:ljiarong@ah163.com。1.4.1蜗牛酶法基金项目:安徽省自然科学基金研究项目(No.070413132);安称取0.5g未研磨的冻干菌体于10mL离心管中,徽大学人才队伍建设项目加入0.6mL缓冲液1和0.1mL蜗牛酶,37e水浴1h。82第26卷第4期生物学杂志Vol126No142009年8月JOURNALOFBIOLOGYAug,20093000r/
