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《血小板裂解液对大鼠BMSCs 成骨分化的干预效应》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国修复重建外科杂志2008年6月第22卷第6期·737·血小板裂解液对大鼠BMSCs成骨分化的干预效应1，2，3311，211，2宋会平王志强赵亚平陈学英张育敏李宝兴【摘 要】目的观察血小板裂解液（plateletlysate，PL）对大鼠BMSCs成骨诱导分化的干预效应。 方法成年健康清洁级Wistar大鼠24只，体重250～300g，雌雄不限。取16只大鼠心内采血，采用3次离心结合反复冻融法制备PL，ELISA法测定PL中PDGF、TGF-β1、IGF-1和VEGF含量。另取8只大鼠，采用全骨髓分离培养法扩增传代
2、BMSCs，取第4代细胞按1×104/cm2接种行成骨诱导培养。按诱导培养液的不同，实验分为3组，A、B组基础诱导培养基中分别含终浓度为5%和1%的PL，C组仅含基础诱导培养基。倒置相差显微镜动态观察各组细胞形态变化及生长状况；诱导培养7d，各组行ALP染色；诱导培养2、8、10d，ALP/总蛋白含量确定ALP活性；诱导培养20d，茜素红染色观察矿化结节形成并定量分析。 结果 PL中PDGF、TGF-β1、IGF-1和VEGF含量分别为（300±30）、（140±25）、（80±35）和（70±20）pg/mL。倒置相
3、差显微镜观察，各组BMSCs形态逐渐发生改变，出现类成骨细胞样形态特征；A组细胞形态变化不及B、C组明显，但细胞增殖较快；20dA组细胞仍密集生长，ECM中形成的矿物沉积显著少于B、C组。诱导培养7d，A组细胞胞浆中有少量颗粒，ALP染色呈弱阳性；B、C组细胞胞浆中有大量棕褐色颗粒，ALP染色呈强阳性。诱导培养2、8、10d，ALP活性定量分析示A组显著低于B组和C组（P<0.05）。诱导培养20d，茜素红染色显示A、B、C组钙结节数量分别为（7.67±1.10）、（12.87±0.81）和（15.59±1.25）个；
4、矿化结节面积分别为（161778.70±44550.80）、（337349.70±56083.24）和（415921.70±71725.39）像素；A组均明显低于B组和C组（P<0.05），B、C组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 PL是多种生长因子的承载体系，以剂量依赖方式抑制BMSCs成骨诱导中ALP活性和矿化结节形成。【关键词】血小板裂解液生长因子 BMSCs 细胞分化大鼠中图分类号：R318 Q813 文献标志码：AINTERVENTIONALEFFECTOFPLATELETLYSATEON
5、OSTEOGENICDIFFERENTIATIONOFBMSCsINRATS/1,2,3311,211,21SONGHuiping,WANGZhiqiang,ZHAOYaping,CHENXueying,ZHANGYumin,LIBaoxing.ShanxiProvincialTissue23Bank,TaiyuanShanxi,030006,P.R.China;DepartmentofAnatomy,SouthernMedicalUniversity;DepartmentofTraumatology,Tangshan
6、SecondHospital.Correspondingauthor:LIBaoxing,E-mail:lbxsir@hotmail.com【Abstract】ObjectiveToexploretheinterventionaleffectofplateletlysate(PL)onosteogenicdifferentiationofBMSCsbyinductioninratsinvitro.MethodsTwenty-fourclean-gradeadultWistarrats,weighingfrom250gt
7、o300g,maleorfemale,wereincludedinthisstudy.PLwasobtainedthroughthreetimesofcentrifugationandrepeatedfreeze-thawforthebloodaspiratedfromcardiaccavitiesin16Wistarrats.ELISAassaywasconductedtodetecttheconcentrationofgrowthfactorsPDGF,TGF-β1,IGF-1andVEGFinPL.TheBMSC
8、sharvestedbyflushingfemursof8adultWistarratswereisolated,cultivatedandexpandedinvitro.Thecellsatthe4passagewereperformedforosteogenicdifferentiationbyinductioninthree
