bmp2活性多肽体外定向诱导大鼠bmscs 向成骨方向分化的实验研究论文

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1、BMP2活性多肽体外定向诱导大鼠BMSCs向成骨方向分化的实验研究论文【摘要】骨形成蛋白2（BMP2）具有较强的诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）向成骨方向定向分化的能力。天然的BMP2数量有限，结构复杂，限制了其广泛应用。本实验设计合成了BMP2活性多肽，体外试验探讨其对BMSCs向成骨方向定向诱导成骨分化的能力，评价BMP2活性多肽的诱导成骨效应。［方法］实验分2组，诱导组和非诱导组。取4周的SCs，传至第3代时，实验组.freell）。非诱导组，仍采用DMEM完全培养基。继续培养2~4周，采用细胞爬片培养、碱性磷酸酶活性和钙含量测定、实时定量PCR检测Ⅰ

2、型胶原（ColⅠ）及骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达，评价BMP2活性多肽的体外诱导成骨能力。［结果］诱导组BMSCs生长良好，表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性，ALP活性上升，钙含量增加，ColⅠ和OPN的mRNA呈高表达。非诱导组，成骨特性不明显。［结论］合成的BMP2活性多肽能有效地促进BMSCs向成骨方向分化，是组织工程化骨中理想的诱导成骨的细胞因子。具有与天然BMP2类似的骨诱导活性，具有广阔的应用前景。【关键词】BMP2活性多肽骨髓间充质干细胞导成骨Abstract：［Objective］Toinvestigatethecapabili

3、tyofsynthesisBMP2derivedpeptideonosteogenicinductioninbonemarrocells(BMSEs),andtoevaluatetheosteoinductivityofBMP2derivedpeptideinvitro.［Method］Aftersegregatingandcultivatingfourarroalcellsininductiongroupediumcontaining200gg/mlBMP2derivedpeptide,andinnoninductionalgroupBMSCsedium.Fo

4、llopreparation,alkalinephosphataseactivityandcalciumdepositioneasured.TypeIcollagen（）andosteopontin（OPN）mRNAexpressioneasuredusingrealtimefluorescentquantitativepolymerasechainreaction（FQPCR）technique.ThecapabilityofsynthesisBMP2derivedpeptideonosteogenicinductionofBMSCsorphology,andsho

5、orphologiecharacteristicssimilartothoseofosteoblasts.Theleverofalkalinephosphataseactivityandcalciumdepositionincreased.ColⅠandOPNmRNAilarcapacityofosteogenicinductionasnatureBMP2,soBMP2derivedpeptideisanidealcellagentforbonetissueengineering,andcanbeavailableesenchymalstemcells，BMSCs）具

6、有多向分化潜能，在一定细胞因子作用下可向成骨细胞方向分化，目前已成为骨组织工程理想的种子细胞〔1〕。骨形态发生蛋白（bonemorphogeicproteins，BMP）属于TGFβ超家族成员，是一种多功能的生长因子，其中BMP2是最主要的骨形成调控因子〔2、3〕。天然BMP2数量有限，且生物活性难以发挥〔4、5〕。本实验根据BMP2的核心功能区氨基酸序列，固相合成法合成一条含24个核苷酸的短肽——BMP2活性多肽，体外诱导大鼠的BMSCs向成骨方向定向分化，评价其诱导效能。1材料与方法1.1主要仪器和试剂倒置相差显微镜（Axiovert35，ZeissCorp，G

7、ermany）；低糖DMEM培养基（Cibco）；胎牛血清（Cibco）；胰蛋白酶（Sigma）；碱性磷酸酶（ALP）活性试剂盒（南京间建成生物工程有限公司）；细胞钙含量试剂盒（Sigma公司）；BMP2活性多肽（本课题组与吉尔生化上海有限公司联合研制）。1.2BMSCs分离和培养取4周龄健康EM完全培养基（含20％小牛血清，100mg／ml青霉素，100mg／ml链霉素）自一端冲洗，制成单细胞悬液，以3×104／ml细胞数接种至100ml培养瓶中，置于37℃、5％CO2及饱和湿度孵育箱中，24h后全