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《茶中茶多酚的高效液相色谱法分离分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第18卷第4期分析试验室Vol.18.No.41999年7月AnalyticalLaboratory1999-07茶中茶多酚的高效液相色谱法分离分析3朱勤艳,陈振宇(香港中文大学生物化学系,香港新界沙田)摘要:用改进的Agarwal方法萃取不同种类茶叶和茶饮料中的茶多酚(greenteapolyphenols,GTPs),建立了用高效液相色谱(HPLC)法对茶多酚进行分离分析的方法。HPLC可有效分离GTPs主要组成成分EC、EGC、ECG和EGCG并精确定量,相对标准偏差小于5%。茶叶加工过程对GTPs含量有很大影响,绿茶总G
2、TPs含量在6～15gö100g干茶叶,乌龙茶总GTPs含量在5～7gö100g干茶叶,红茶总GTPs含量低于2gö100g干茶叶。关键词:茶多酚;高效液相色谱;茶叶;茶饮料中图分类号:O65文献标识码:A文章编号:100020720(1999)042070203近年来,茶多酚生理机制的研究日益受到HPLC,Deerfield,IL,USA),色谱柱(Hypersil人们的重视。茶多酚生理机制研究通常需要对ODS,250×4.6mm,5Lm,Alltech,Deerfield,茶多酚各组分进行分离纯化和精确定量测定,IL,USA
3、),紫外检测器(UVIS-205,Alltech,常用的茶多酚测定方法有酒石酸亚铁分光光度Deerfield,IL,USA),SP4600型积分仪。法、高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法,其中酒各种市售绿茶、红茶、乌龙茶;各种市售茶[1]饮料;儿茶素(catechin):购自Sigma公司,色石酸亚铁分光光度法被定为国家标准,但上述方法均为茶多酚总量测定,通常用于茶及茶谱纯;EC,ECG,EGC,EGCG:购自日本多酚制品的品质指标鉴定,且测定结果的重现KuritaIndustrial公司,色谱纯。[2,3]2实验方法性、精密度都不
4、够理想,难以满足进行茶多酚生理生化机制研究的需要。高效液相色谱法2.1GTPs的提取[4]是目前实验室应用最广泛、最有效的分离分析茶叶中GTPs抽提参照Agarwal方法,技术之一,具有分辨率高、分析速度快、重复性作下述改进:取0.2g粉碎茶叶,悬浮于含儿茶好、定量分析精确度高等优点,并可用作实验室素内标物(质量浓度约为3.0göL)的3.0mL小量制备。为此,进行了利用高效液相色谱蒸馏水(80℃)中,30min后,冷却至室温,过滤(HPLC)法分离分析茶多酚主要成分的研究。除渣,用等体积氯仿抽提除去咖啡因和色素,取1主要仪器与
5、试剂上层水相,用等体积乙酸乙酯抽提两次,弃水高效液相色谱仪(AlltechModel525相,保存乙酸乙酯相待测。收稿日期:1998208214作者简介:朱勤艳(1965-),女,34岁,博士研究生—70—第18卷第4期分析试验室Vol.18.No.41999年7月AnalyticalLaboratory1999-07茶饮料中GTPs抽提方法:取1mL茶饮于5%,主要成分为EC、EGC、ECG、EGCG,另料,加入10LL含儿茶素内标物(质量浓度约为有数个未知少量组分。我们利用HPLC法分离3.0göL)的水溶液,用等体积乙酸乙
6、酯抽提两纯化的茶多酚异构物,已进一步进行茶多酚生[5]次,保存乙酸乙酯相待测。理生化机制研究。2.2GTPs抽提物的HPLC分析表1龙井茶GTPs组成成分取15LL待测样品,通过微量加样系统Table1Compositionoflongjingteapolyphenols(20LL容积,Cotati,CA)注射上柱,流动相为含量相对标准偏差GTPs(gö100g干茶叶)(n=3)(%)体积分数为0105%的硫酸水溶液;乙腈:乙酸EGC0.090.0乙酯(86:12:2,vövöv),流速1mLömin,用紫EC0.530.0外检
7、测器(UVIS2205,Alltech,Deerfield,IL,EGCG6.470.3USA)监测分离的GTPs异构物,用儿茶素作ECG2.050.1其他0.980.3为内标进行定量,根据相对保留时间以及与总GTPs10.130.5EC、EGC、ECG、EGCG混合色谱分析鉴定各GTPs异构物,用ANOVA数据处理系统计算312不同茶叶品种GTPs成分分析各GTPs异构物成分含量。根据生产过程的不同,具有代表性的茶叶3结果与讨论类型有:非发酵的绿茶,部分发酵的乌龙茶和完3.1GTPs组成的HPLC分离分析方法的建全发酵的红茶。
8、我们从市售茶叶中选择数种有立代表性的茶叶品种,分析其GTPs组成成分,结选用极品龙井茶,按211方法抽提GTPs,果如表2所示。按212方法分析龙井茶GTPs抽提物,重复进表2绿茶、乌龙茶和红茶中茶多酚成分分析样3次。其HPLC图谱见图1。利用ANOVA(gö1
