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《高效液相色谱法测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸的含量_顾振宇》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第7卷第3期中国食品学报Vol.7No.32007年6月JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnologyJun.2007高效液相色谱法测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸的含量顾振宇吴雪美张虹(浙江工商大学食品学院杭州310035)摘要为建立检测冬虫夏草中虫草素和虫草酸的方法,用甲醇超声提取虫草素、水超声提取虫草酸,再用高效液相色谱、示差折光检测器与紫外检测器串联的方法测定虫草素和虫草酸含量。通过对样品进行预处理、色谱条件和方法学指标的验证,建立了定量检测虫草素、虫草酸的新方法
2、,二者回收率在90%～101%之间,二者日内、日间精密度(RSD)≤7.2%。虫草素、虫草酸检出限分别为50ng/mL和1.5μg/mL。该方法具有快速、准确、简便的特点。关键词高效液相色谱冬虫夏草虫草素虫草酸文章编号1009-7848(2007)03-0144-05冬虫夏草是真菌寄生在蝙蝠类昆虫上的结合培育冬虫夏草以及该类保健品的质量控制极为重[1]体,属于子囊菌纲,肉座菌目(Hypocre.ales),麦角要。本文建立了1种快速测定虫草素、虫草酸含量菌科(Clavicipitaceue),虫草属(Cordyceps),
3、生长的方法。于高寒山区,常见于海拔4km以上的高山上,主NH2[1～2]要分布于我国四川、西藏、青海、云南等地,为我国特有的名贵药用真菌[3]。冬虫夏草内含有丰富的NN虫草酸、虫草素以及各类氨基酸等营养物质,具有扩张气管、镇静、抗心律失常、降血压、抗病原微生NHOCH2N[4]O物、抗恶性肿瘤等功效。目前已有不少以虫草提取物为主要成分的保健品、化妆品、药品投放市[5]场。虫草素(Cordycepin)是1种腺苷类活性物质,OH是第1个分离自真菌中的核苷类抗菌素,其分子图1虫草素结构式式为C10H13N5O3,分子质量为25
4、1Da,结构式如图1Fig.1Thestructuralformulaofcordycepin[6]所示,为3-脱氧腺(3-Deoxyadenosine)。虫草素[3,7]的提取方法有回流提取法、超声波提取法等,其测定方法有薄层色谱法、高效液相色谱法和毛细CH2OH[8]管电泳法等。虫草酸的结构式如图2所示,为D-HOH甘露醇。虫草酸的提取方法有水提取法、醇提取法HOH[5,9]等,其测定方法有容量法、光度法、高效液相色[10]HOH谱法等。天然冬虫夏草资源极为有限。近年来,人工培HOH育虫草及产业化已取得成功。虫草素、虫
5、草酸是冬CH2OH虫夏草的重要活性成分,对其含量的测定,对人工图2虫草酸(D-甘露醇)结构式收稿日期:2006-06-28Fig.2Thestructuralformulaofcordycepacid(D-mannitol)作者简介:顾振宇,男,1965年出生,高级实验师第7卷第3期高效液相色谱法测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸的含量1451材料和方法虫草素:色谱柱为汉邦C18柱(4.6mm×2501.1材料mm,5μm),柱温30℃。检测器为二极管阵列紫外人工培养冬虫夏草菌丝体,60目粉末,上海检测器(DAD),检测波长26
6、0.4nm。流动相:V(乙上恩生物科技有限公司提供。腈)∶V(水)=80∶20,流速0.8mL/min。用0.5μm1.2试剂微孔滤膜过滤,进样量10μL。虫草素梯度洗脱程虫草素标样,sigma公司;甘露醇;乙腈,色谱序见表1。纯,merck公司;甲醇,色谱纯,merck公司;超纯表1虫草素梯度洗脱程序水,Millipore纯水系统制备,美国Millipore公司。Table1Gradientelutionsequenceforcordycepin1.3仪器时间/流速/流动相A/流动相B/梯度曲线minmL-1waters
7、2695高效液相色谱仪、waters2696二极·min%%00.85956管阵列紫外检测器(DAD)、waters2414示差折光170.810906检测器。220.8604061.4样品预处理350.8595111.4.1提取虫草素准确称取冬虫夏草粉末注:11即时变化,6线性变化。10.188g,虫草与甲醇料液比1∶10(虫草1g∶甲醇虫草酸:色谱柱为汉邦C18柱(4.6mm×25010mL),采用超声波提取20min,共提取3次;mm,5μm),柱温30℃。流动相:乙腈∶水(体积比4000r/min离心5min,取上
8、清液,合并3次上清80∶20),等度洗脱,流速0.8mL/min,柱温30℃。检液,浓缩并定容至25mL。测器为waters2414示差折光检测器(RID),用0.51.4.2提取虫草酸称取冬虫夏草粉末0.506g,μm微孔滤膜过滤,进样量5μL。加水5mL,采用超声波提取30min,再静置30min后
