虫草素、虫草酸、腺苷提取及含量测定实验方案

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1、虫草素及虫草酸提取及含量测定实验方案一，实验目的虫草素、腺苷是蛹虫草的重要活性成分，虫草酸也是虫草的重要组成成分。对大米培养基培养出的虫草子实体，和活体蚕蛹培养出的虫草子实体在加热干燥和冷冻干燥两种条件下，进行虫草素、虫草酸及腺苷的提取及含量测定。分析大米培养基是否与活体蚕蛹在培养虫草方面有差异，检验干燥的方式是否对虫草素、腺苷、虫草酸的提取有影响。二，实验材料两种虫草子实体（大米培养基，蚕蛹）三，实验3.1仪器与药品甲醇色谱纯、乙氰色谱纯、虫草酸标准品、腺苷标准品、虫草酸标准品；HPLC相关仪器。水为超纯水。3.2提取方法虫草素、腺苷、虫草酸均采用水超声提取法3.2提取过程精确称取干燥至恒重

2、的两种虫草子实体（粉碎过0.25mm筛）各0.2g，加水20ml超声提取50min，过滤，滤液经冷冻干燥后定容至5ml，最后过0.22μm滤膜，保存备用。3.3标准工作液配制精密称取虫草素、腺苷、虫草酸对照品适量,加超纯水,超声波震荡溶解,最后定容分别配制成0.1、0.2g/L，虫草酸1.0g/L的标准储备液备用．3.4测定方法采用高效液相色谱法（HPLC法）测定3.5色谱条件虫草素、腺苷：流动相为甲醇（A）与水（B），采用梯度洗脱，洗脱程序：O-5min，2%A；5-10min，2-12%A；1O-12min，12-15%A；12-30min，15%A。色谱柱为汉邦C18柱(4.6mm×25

3、0mm，5μm),检测波长为260nm,柱温为30℃，流速1mL/min，进样量20μL。虫草酸：色谱柱为汉邦C18柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温30℃。流动相:乙腈∶水(体积比80∶20),等度洗脱,流速0.8mL/min,柱温30℃。检测器为waters2414示差折光检测器(RID),进样量20μL。四，实验结果4.1虫草素、虫草酸、腺苷等的标准曲线精密量取虫草素标准品1,2,5,10,20，40μL进样分析；量取腺苷标准品0.5,1，2.5,5,10,30μL；量取虫草酸标准品12,18,24,30,36,40μL通过计算获得虫草素、腺苷、虫草酸标样的进样量与峰面积的线性回

4、归方程。4.2回收率准确称取蛹虫草3份，分别加入不同浓度的虫草酸；准确称取蛹虫草3份，分别加入不同量的虫草素；准确称取蛹虫草3份，分别加入不同浓度的腺苷，按3.2节方法处理样品,定容后进样检测。4.3精密度对上述虫草素、腺苷和虫草酸对照品溶液连续进样6次，进样量为20μL，测定其峰面积，检测仪器精密性。4.4稳定性取三种供试品溶液，分别在0，2,4,6,8,10h进样，测定虫草素、腺苷、虫草酸的其峰面积，检测供试样的稳定性。4.5重复性取同批样品精密称定0.2g三份，制备供试品（同上）,色谱条件下测定(同上)虫草素、腺苷、虫草的其峰面积，检验样品重复性。