资源描述：
《快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第19卷,第4期光 谱 实 验 室Vol.19,No.42002年7月ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryJuly,2002快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探讨①杨敏文(台州职业技术学院医学院 浙江省台州市高等教育园区 318000)摘 要 本文应用分光光度法研究了3种提取溶剂对测定植物叶片叶绿素含量的影响,结果表明,用不同提取溶剂提取叶绿素,提取液吸收光谱相似。其中丙酮2乙醇提取法速度快,叶绿素得率高、稳定性好,精密度高,并提出了一种快速测定叶绿素含量的方法。关键词 叶绿素含量,测定,方法,叶片。中图分类号:O657.32 文献标识
2、码:A 文章编号:100428138(2002)04204782041 前言植物叶片叶绿素含量与光合速率、营养状况等密切相关,实践上通常测定叶绿素含量以表征植物生长状况,也往往把叶色变化作为看苗诊断和肥水管理的重要指标。叶绿素含量测定方法主要有[1][2]分光光度法和活体叶绿素仪法两大类,最近又发展了光声光谱法。其中,应用最为广泛的是分[3][4]光光度法。用得较多的是由Mackinney提出经Arnon解释和推导的Arnon法以及80年代初提[5]出的乙醇提取法,本试验提出另一种提取溶剂——丙酮2乙醇混合法提取叶绿素,以常规的Arnon法(提取溶剂为80%丙酮)和乙醇提取法作
3、对比,就3种提取液对测定植物叶片叶绿素含量的影响进行了研究比较,并提出了一种快速测定叶绿素含量的方法。2 实验部分2.1 仪器与试剂UV2401PC型紫外可见分光光度计(日本岛津,狭缝宽度012nm,吸光池厚1cm),FSH2Ê高速电动匀浆器(金坛望华科教仪器厂),FA1004A型电子天平(上海精天电子仪器厂)。将珊瑚树嫩叶用双蒸水洗净,吸水纸吸干表面水分,作为试验材料。叶绿素提取溶剂为:95%丙酮2乙醇(用体积比为2∶1的丙酮2无水乙醇混合液配成95%的水溶液,下同)、95%乙醇和80%丙酮,均为分析纯。2.2 实验方法叶绿素的提取:将材料去脉剪碎(约1—2mm见方),随机取样,
4、准确称重取015g(精确到011mg),放入50mL比色管中,分别加入上述三种提取液25mL;另称015g样品,加6mL双蒸水和少量CaCO3,匀浆,定容至25mL,过滤,取2125mL滤液放入50mL比色管中,加23175mL丙酮2乙①联系人,电话:(0576)5157136作者简介:杨敏文(1965—),女,浙江省台州市人,高级讲师,华东师范大学2001年在职教育硕士,从事化学教学与研究。收稿日期:2002201201第4期杨敏文:快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探讨479醇(2∶1),使之成为95%丙酮2乙醇匀桨提取液。比色管加塞放置于25℃生化培养箱内暗中提取叶绿素。每种提
5、取方法重复3次。叶绿素提取液吸收光谱的测定:用分光光度计在600—700nm范围内对不同叶绿素提取液进行扫描,波长精度为012nm。叶绿素含量测定:分别以提取溶剂作空白,测定叶绿素提取液吸光度A645、A663,利用Arnon公式:叶绿素a浓度(mgöL):Ca=12.7A663-2.69A645;叶绿素b浓度(mgöL):Cb=22.9A645-4.68A663;叶绿素总浓度(mgöL):Ca+b=Ca+Cb。计算提取液中叶绿素浓度,换算为每克鲜叶叶绿素含量(mgög鲜重)。3 结果与讨论3.1 叶绿素提取液的吸收光谱4种叶绿素提取液的吸收光谱在600—700nm范围内基本相似(
6、图1),说明4种叶绿素提取液的光吸收性质基本相似,可以用Arnon公式进行叶绿素含量的计算。3.2 不同提取溶剂对叶绿素提取总量的影响不同提取溶剂对叶绿素提取总量有着明显的影响(表1),95%丙酮2乙醇提取的叶绿素总量最高,高于传统的80%丙酮提取法2915%,95%乙醇提取的叶绿素总量亦比80%丙酮法图1 珊瑚树叶片叶绿素在不同提取液中的吸收光谱高915%。95%丙酮2乙醇提取叶片匀浆的叶绿1——95%丙酮2乙醇;2——95%乙醇;素总量与提取叶片碎片的叶绿素总量没有显著3——80%丙酮;4——95%丙酮2乙醇(匀浆)。差异。3.3 不同提取溶剂提取叶绿素的进程不同提取溶剂提取叶
7、绿素速度差异较大,提取完全程度也不同(表1)。提取速度最快的是95%丙酮2乙醇,叶绿素经过8h已经基本提取完全,叶片碎片变白;其次是95%乙醇,而80%丙酮提取速度最慢,后两者在24h内没有完全提取出叶绿素。从提取速度来看,95%丙酮2乙醇要优于95%乙醇和80%丙酮。叶片匀浆后用95%丙酮2乙醇在015h就已经提取完全,大大加快了叶绿素提取速度。①表1 不同提取溶剂提取叶绿素的进程和叶绿素总量叶绿素含量(mgög鲜重)提取溶剂0.5h1h2h4h8h16h24h叶绿
