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《细胞破碎方法对几丁质脱乙酰酶活力影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、细胞破碎方法对几丁质脱乙酸酶活力的影响岳洪霞,赵祥颖2田延军2张家祥2杨丽萍2韩延磊2刘建军,2(1.山东轻工业学院济南250353)(2.山东省食品发酵工业研究设计院济南250013)摘要实脸室保藏一株产几丁质脱乙既酶(CDA)的菌种,经过验证该酶属于胞内酶,为进一步分离纯化,需时细胞进行破碎本文以细胞破碎后上清液酶活为指标,通过比较几种常用细胞破碎方法,最终确定破碎该细胞提取CDA的最佳方法:发酵液洗涤三次,用pHS.0Trjs一Hc1缓冲液悬浮菌体,先进行反复冻融,然后再用玻璃匀浆器处理6min,离心测上清液酶活,比破碎前上清液酶活提高了5.58倍关键词几丁质脱乙耽酶(CD
2、^)细胞破碎玻璃匀浆反复冻融超声波溶菌酶TheEfectofCellDisruPtiononChitinDeacefylaseActivity丫ue日ongxsazhaoxiangyingZ丁ianYanjunZZhangJiaxiangZYangLipingZHanYan.eiZLiuJianjunl,2(1.ShandongLightIndustryInstituteJinan250013)(2.ShandongFood&FermentationIndustryRes.&Des.Institue)Abstraet:ThestrainsKePtinourlaboratorywasa
3、bletoProdueeehitindeaeetylase(CDA),whichwaseertifiedendoenzyme.InordertoPurifytheCDA,weneedtoruPturethecell.InthisPaPer,wecomParedseveraleommonlymethodsofeelldisruPtionanddeterminedthebestwaytoextraetCDA.TheoPtimummethod15asfollows:fermentingliquorwaswashedthreetimes,andthethalluswassusPendedwit
4、hTris-HCIbuferPHS.0.ThesolutionwasrePeatedfreezedandthentreated6minbyglasshomogenizer.FinallythesuPernatantwasobtainedbyeentrifuge.AndtheenzymeaetivityofthesuPematanthasinProved5.58timesovertheeontrast.Keywo司s:ehitindeaeetylase(CnA);eelldisruption;glasshomog已nizer;multigelation;supersoniewavelys
5、ozyme1概述丁质远远超过其它氨基多糖,是一种丰富的自然1.1几丁质壳聚糖资源几丁质是白色或灰白色半透明片状固几丁质主要存在于低等植物菌类藻类的细体,其不溶性限制了应用范围,所以大多加工成胞,甲壳动物虾蟹昆虫的外壳,高等植物壳聚糖使用的细胞壁中,是世界上储量仅次于纤维素的第二几丁质部分乙酚基脱去之后即为壳聚糖,壳聚大天然有机化合物自然界中每年生物合成的几糖能溶于稀酸等多种溶剂,并且其分子中存在经基ShandongFoodFermentation一3一和大量的游离氨基,性质比较活泼,可以与交联剂进有自己的适用范围及优缺点,因此不同的材料要用行交联改性衍生化等操作,具有更好的可降解
6、性不同的方法进行破碎和生物相容性,在食品化妆品轻工印染环保和1.4本文主要内容生物医药等领域的应用也逐步得到开发[l鉴于壳实验室保藏一株产几丁质脱乙酞酶(CDA)聚糖在很多领域中有广泛应用,因此以几丁质为原的菌种,该菌所产CDA为胞内酶,为提取纯化该料生产壳聚糖越来越引起人们的关注酶,应先进行细胞破碎本文主要研究几种细胞目前,工业上主要以几丁质为原料采用强碱热破碎方法对细胞破碎前后CDA酶活力的影响化学法生产壳聚糖,但是该法不仅污染严重,且反应过程不易控制,产品分子量不稳定,均一性不好,2材料与方法无法更好地满足生物医药等领域对壳聚糖质量的2.1材料:要求!2]相比强碱热化
7、学法,酶法生产壳聚糖具有条菌种:实验室保藏菌种,属于红球菌件温和环境友好产品质量稳定等特点,引起了人2.2方法:们的高度关注,已成为国内外的研究热点(l)酶活测定方法:1.2几丁质脱乙酞酶(CDA)在总体积为5.omL的反应液中,含lmLZomg/fL丁质脱乙酞酶(比itindeaeetylase,简称L的对硝基乙酞苯胺水溶液lmL适当浓度的酶CDA,E.C.3.2.1.41)可以将真菌细胞壁中新生成液及50#预保温的浓度为0.05M的磷酸
