乳酸钠缓冲液

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1、以上介绍的方法用于测定中性蛋白酶(pH7.2)。若要测定酸性蛋白酶或碱性蛋白酶,则把配制酪蛋白溶液和稀释酶液用的pH缓冲液换成相应pH缓冲液即可。现把几种常用pH缓冲液配方提供如下:1.5.1pH7.5磷酸盐缓冲液(0.02mol/L)称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)6.02g和磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)0.5g以蒸馏水溶解定容至1000mL。1.5.2pH2.5乳酸-乳酸钠缓冲液(0.05mol)A液:称取80%～90%乳酸10.6g,加蒸馏水稀释定容至1000mL。B液:称取70

2、%乳酸钠16g,加水稀释定容至1000mL。取A液16mL与B液1mL混合稀释一倍即成。1.5.3pH3.0乳酸-乳酸钠缓冲液(0.05mol)A液:称取80%～90%乳酸10.6g,以水定容至1000mL。B液:称取70%乳酸钠16g,蒸馏水溶解定容至1000mL。取A液8mL与B液1mL,混合稀释一倍即成。1.5.4pH10硼砂-氢氧化钠缓冲液A液:称取硼砂19.08g,用蒸馏水溶解定容至1000mL(0.05mol)。B液:称取氢氧化钠8g,用蒸馏水溶解定容至1000mL(0.2N)。取A液250mL

3、,B液215mL混合,用蒸馏水稀释定容至1000mL即成。1.5.5pH11.0硼砂-氢氧化钠缓冲液A液:称取硼砂19.08g,用蒸馏水定容至1000mL。B液:称取氢氧化钠4g,用蒸馏水定容至1000mL。取A液与B液等量混合。1.5.62%酪蛋白溶液配成酸性时,须先加数滴浓乳酸,使之湿润以加速其溶解。请问50mmol/L的乳酸钠缓冲液（PH4.5）和125mmol/L的酒石酸钠缓冲液(PH3.0)如何配制？？从瓶子上查1mol/L的试剂要加多少水，按比例加，然后分别稀释20倍，8倍就行了。调PH比较麻烦

4、，配50mmol/L的乳酸钠用乳酸调到PH4.5125mmol/L的酒石酸钠缓冲液(PH3.0)用酒石酸/氢氧化钠调到3.0调PH的原则是不引入其他离子。有这个公式的无机化学上有缓冲溶液buffersolution缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们时蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各

5、类细胞和器官中是不同的。在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到我们工作的成效。如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至完全失活。所以我们要学会配制缓冲溶液。由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，在生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬

6、酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反应。硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑止的作用。其主要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris一缓冲液，在4℃时是8.4，在37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液

7、拿到37℃测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，缓冲能力很差。缓冲液的pH值由哪些因素决定？设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式：根据此式可得出下列几点结论：（1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐的比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。（2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。（3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲

8、效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般地说缓冲液有效缓冲范围为PK±1pH。从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。讲义附录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用