微绿球藻固定化培养及其对对虾养殖水质调控

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1、微绿球藻固定化培养及其对对虾养殖水质调控郑莲，黄翔鹊，刘楚吾，陈艳娟(湛江海洋大学水产学院，广东湛江524025)摘要:用揭藻酸钙作固定化载体，初步探讨了胶球直径、不同接种量、CaC12溶液浓度、褐藻酸钠浓度等固定化条件对微绿球藻(Nannochlorisoculata)生长及其对养殖水质的影响。结果表明，微绿球藻固定化培养的最好条件是胶球的直径为2.5nnn,微藻接种量为1x106Cell/mL,CaCl2溶液的质量分数为3%,揭藻酸钠溶液质量分数为2%。在此条件下制备的固定化藻珠，微绿球藻生长率较高，生长周期较长。实验期间固定化微绿球藻的生物量增加了约17倍，证明了它的生理活性不会因

2、固定化而受干扰。引入固定化的微绿球藻不但可以降低养殖水体中氛氮、亚峭酸氮等有害因子的浓度，还能提高水中溶解氧含量，使水体环境长时问处于良好的动态平衡状态。关键词:固定化培养;微绿球藻;养殖水质;调控中图分类号:Q178.112文献标识码:A文章编号:1000-3096(2005)06-0004一05藻类固定化技术起始于20世纪80年代，早期主材料与方法要应用于生化生产和能源提供。〕。在环境领域中固定1.1藻种来源化藻类主要应用于生物监测和废水处理，它具有藻细实验所用的微绿球藻(Nannochlarisoculata)于胞密度高、反应速度快、运行稳定可靠、微生物流失2000年3月从海南三亚

3、湛泰对虾养殖场分离所得，经少、不需分离、能提纯和保存高效菌株等优势。固定化驯化培养在实验室备用。微藻细胞净化污水的研究刚刚起步，其研究包括对1.2}e养条件N,P的去除[2-41，对重金属的吸收，如Wilkinson等[[5微藻培养用海水取自湛江市东风码头海区，经过人研究表明，用海藻酸钙固定小球藻可去除污水中沉淀、沙滤和煮沸后冷却的海水。质量密度为1.010士99%的汞，固定化技术大大提高了藻类对重金属的富0.001。培养液成分采用湛水107一18培养液配方，培集。孙红文等[6〕指出，藻类能为降解有机物的好氧细养容器为1000mL三角烧瓶，培养光源为自然光照，菌提供氧气，因而提高抗击高浓

4、度废水的能力，并指光照强度为600--10000lx，培养温度为291C11r-。出藻类固定化技术用于废水治理是非常有前景的，培养过程中每日振摇数次，保证微藻正常生长。尤其是采用藻菌共生系统。陈衍昌[n1初步研究了固1.3固定化胶球制备定化栅藻改善养殖水质。微绿球藻(Nannochlorisocu-藻酸盐为化学纯褐藻酸钠，称取不同质量的褐藻lata)是虾池中广泛存在的优势藻种，隶属于绿藻门酸钠，慢慢搅动(约4h)分别溶入1000mL蒸馏水，并(Chlorophyta)的四胞藻目(Tetrasporales)[e1。作者以微绿球藻为材料，以褐藻酸钙包埋固定在不同条件下培养以选择固定化培养的

5、最佳条件。以期为固定化培养海洋微藻技术的应用及发展提供必要的实验依据和收稿日期:2003-12-23;修回日期:2004-05-10理论基础，同时也为今后微藻生态调控防病理论的研基金项目:广东省科技攻关项目(C20328)作者简介:郑莲(1967-)，女，广东湛江人，硕士，实验师，电究提供依据。话:0759一2382180,E一mail:Li2382180@163.net海洋科学/2005年/第29卷/第6期分别加入NaCl20g，配制成一定体积不同质量浓度的强度为600--2000lx，水温度为29'C11`C，并加入微凝胶溶液，高温灭菌冷却备用。按凝胶溶液体积:藻藻生长所需的营养盐。

6、每组放养对虾25尾，各组通气量、温度，盐度、投饵量和投饵次数等实验条件保持一液为1:4接种藻种，充分搅匀，然后用注射器吸取混致。合液，通过不同的针头，以5rrL/nun的速度滴入不同质量分数的CaCl2溶液中，边滴边摇，此时褐藻酸钠中1.6浏定的方法的Na+与。C1:中的Cat十发生置换，形成褐藻酸钙凝1.6.1藻细胞数量的测定胶网状结构，从而使细胞得以固定，约30min后形成每4d取相同个数的胶球加入一定体积的5%的固定化的胶球。用消毒海水洗涤3次，移入1000mL柠檬酸钠溶液溶解胶球并用血球记数板在显微镜下的三角烧瓶内，每瓶装150rd-的培养液，接种300粒计算藻细胞数量。胶球。1

7、.6.2生长率的测定1.4固定化条件的选择根据公式K=(1nN,一1nNd/T其中:N。是开始的细胞数N‘是经过T时间后的细胞数T代表一段1.4.1藻珠大小的对比试验生长的时间，K为相对生长常数表示生长效率。用不同大小的针头滴成不同大小的藻珠，设21.6.3水质因子的测定个平行组。试验结束后，分别从试验组和对照组取水样来测1.4.2接种量试验定各项水质因子，氨氮(NH3一N)用奈氏试剂法测定;用100,105、106级&li/mL藻