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1、研究简报北方园艺2010(23):32~34小白菜叶绿素含量的测定方法比较徐芬芬,叶利民,徐卫红,郑静萍(上饶师范学院生命科学学院,江西上饶334001)摘要:以小白菜为试材,研究了5种提取方法对小白菜叶片叶绿素提取效果的影响,并测定叶绿素在5种不同提取液中的稳定性。结果表明:小白菜叶绿素提取效果最好的是混合液(乙醇丙酮=11)浸提法,其次为混合液(乙醇丙酮水=4.54.51)浸提法和混合液(乙醇丙酮=21)浸提法,丙酮研磨法和乙醇浸提法效果较差。关键词:小白菜;叶绿素;提取方法;稳定性中图分类号:S634.3文献标识码:A文章
2、编号:1001-0009(2010)23-0032-03叶绿素是光合作用最重要的产物,同时叶绿素含量试管中,剪取叶片成2mm碎条,在室温下立即用丙酮研也是植物重要的生理指标之一。因此,研究叶绿素的提磨法和直接浸提法(4种提取液:95%乙醇,丙酮、乙醇取方法意义重大。叶绿素含量测定方法一般有分光光(11),95%乙醇、丙酮、水(4.54.51),丙酮、95%乙度法、活体叶绿素仪法和光声光谱法,以分光光度法应醇(21))提取叶绿素,3次重复。研磨法参照张志良方[8]用最广泛。因所用提取叶绿素的溶剂不同又有多种测法。浸提在黑暗中进行,每支试管加
3、入浸提液10mL,[1]定方法,早期叶绿素测定广泛采用Aron法,但该方法并不时摇动,等叶片变白,约14h后定容25mL,测定吸由于先研磨后除渣,工作量大、步骤多,且容易受光氧化光值。室温下以相应试剂为参比,分别在645nm和[2]而引起偏差,不适宜田间大量样品的提取和测定。徐663nm处测定吸光度,由Arnon公式计算叶绿素a与叶[3]邦发等通过比较几种不同混合提取液的提取,提出测绿素b的含量。叶绿素a(chla)含量(mg/g)=(12.7!定棉花叶片叶绿素含量的最佳方法为丙酮浸提法。陈A663-2.69!A645)!V/(1000W);
4、叶绿素b(chb)含量[4][5]福明等和刘绚霞等分别对不同配比的丙酮、乙醇和(mg/g)=(22.7!A645-4.68!A663)!V/(1000W);叶水的混合液的浸提效果进行了研究,证明利用混合液进绿素总含量(mg/g)=chla含量+chlb含量。式中[6]行叶绿素浸提的可行性。洪法水等研究表明,丙酮与A663、A645分别为相应波长下的吸光度值,V为提取液乙醇混合液提取叶绿素存在协同效应,且二者在等摩尔体积,W为所取叶片质量。[7]混合时提取效果最好,而彭运生等研究认为,丙酮乙1.2.2不同浸提液提取效果及稳定性试验光稳定性醇
5、(21)混合液浸提叶绿素效果较好。该试验在前人试验:将样品于测定后见光放置,分别于放置1、3、5h后研究的基础上进一步探讨叶绿素含量测定各方法的优再次测定提取液中叶绿素的变化,比较叶绿素在不同提劣及快速测定的步骤,为小白菜田间大样本叶绿素含量取液中的稳定性。热稳定性试验:用浸提法进行叶绿素测定提供依据。提取试验,取提取液10mL于有塞试管中,水浴中加热,1材料与方法分别在30、50、70∀条件下保温10min,冷却到室温后,1.1试验材料测定叶绿素含量。将新鲜小白菜叶片洗净、晾干、去大叶脉后剪碎混2结果与分析匀。试验采用752S紫外可见
6、分光光度计,丙酮、95%乙2.1不同提取方法的提取效果及光稳定性比较醇等试剂均为分析纯,试验用水为二次水。由表1~5可知,5种不同提取方法以混合液(乙1.2试验方法醇丙酮=11)浸提法所得总叶绿素含量最高(为1.2.1不同浸提液提取效果试验称取0.5g试材于0.438);乙醇浸提法最低(仅0.305);其它3种提取方法相差不大。降解值以丙酮研磨法最快(为0.263);混合第一作者简介:徐芬芬(1978),女,江西奉新人,硕士,讲师,现主液(乙醇丙酮水=4.54.51)浸提法其次(为0.要从事植物生理教学与研究工作。Email:xf
7、fylm7875@163.com。208);混合液(乙醇丙酮=21)和混合液(乙醇丙酮基金项目:江西省教育厅2010年度青年科学基金资助项目=11)浸提法较慢(分别为0.185和0.165)。说明,丙(GJJ10255);上饶师范学院2010年教学改革研究资助项目。酮研磨法可能因研磨过程破坏了叶绿体,所提取的叶绿收稿日期:2010-09-06素在光下极不稳定。而混合液(乙醇丙酮=21)和32北方园艺2010(23):32~34研究简报混合液(乙醇丙酮=11)浸提法可获得较高的叶绿表4乙醇丙酮=21浸提法所得叶绿素素含量,同时在光下也
8、有较好的稳定性。含量及光稳定性比较随见光时间的延长,各种提取方法均以叶绿素a降乙醇丙酮=21浸提0h1h3h5h7h降解值chla0.3000.2350.203
