磁微粒子化学发光法测定AFP

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1、磁微粒子化学发光法测定AFP、CEA的应用关键词】 癌胚抗原　　【摘要】目的研究磁微粒子化学发光酶免疫法检测的可靠性及方法学评价。方法 利用磁微粒子化学发光法检测血清AFP、CEA，并进行精密度、灵敏度、特异性、回收率方面的探讨。结果 化学发光法测定AFP的线性范围0.30～1380μg/L，CEA的线性范围0.51～1067μg/L。测定AFP的批内精密度CV值为1.16%～3.53%，批间为1.49%～4.67%;CEA的批内精密度CV值为0.87%～4.47%，批间为1.92%～4.71%。AFP的最低检测限度0.30μg/L;CEA的最低检测限度0.51μg/L。AFP的回收率9

2、7.7%～99.0%;CEA的回收率98.4%～101.65%。黄疸、脂血、溶血对AFP、CEA的测定无明显影响。结论 磁微粒子化学发光酶免疫法在病人结果可报告范围宽、精密度好、灵敏度高、特异性高、抗干扰能力强。　　【关键词】 磁微粒子化学发光甲胎蛋白癌胚抗原     　　近十年来通过不断改进和发展，使化学发光免疫分析成为非放射性标记免疫分析中最有前途的方法之一。测定时间短，无放射污染等特点，广泛应用在临床和科研［1］。甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA）是最常用的肿瘤标志物之一。它们的测定有助于肿瘤病人的诊断、治疗及术后疗效观察。BECKMANCOULTER公司生产的ACCESS型免

3、疫分析仪，即全自动微粒子化学发光免疫分析系统。我们用此法对血清中的AFP和CEA的测定，作了精密度、分析灵敏度、回收试验及干扰试验等实验，现报告如下。　　1材料与方法    　　1.1仪器美国BECKMANCOULTER公司生产的ACCESS型全自动化学发光免疫分析仪。   　　1.2试剂AFP和CEA试剂盒由BECKMANCOULTER公司提供配套试剂。   　　1.3方法按仪器操作手册，用配套试剂盒测定定值、样品。数值在标定值允许的范围内，继续做精密度、灵敏度、回收试验和干扰试验等相关实验。　　2结果    　　2.1精密度采取批内和批间差异来确定。分别取AFP和CEA高、中、低浓度

4、各三份混合血清标本，其中一半重复测定20次，计算均值、方差，及批内CV值。另外一半分成20份，装入塑料离心管置于-20℃冰箱，每天1次连续测定20天，计算均值、方差及批间CV值。结果见表1。    　　表1AFP和CEA批内、批间变异值（略）   　　2.2分析灵敏度分别对AFP和CEA空白零标准作批内20次检测，分别记录发光强度并作统计，再计算检测低限（LLD）［2］。公式:LLD=均值BLK+2SBLK。结果AFP低限为0.30μg/L，CEA为0.51μg/L。   　　2.3回收试验取不同浓度的混合血清（AFP为4.34、23.85、138.21;CEA为1.89、15.23、5

5、8.65）分别加入不同浓度定值血清的AFP和CEA。分别测定AFP和CEA的含量，用公式:（测定值-混合血清值）/定值血清值×100%计算回收率，结果AFP的低、中、高标本平均回收率分别为97.7%、98.5%、99.0%。CEA的低、中、高平均回收率分别为101.6%、98.4%、99.5%。   　　2.4干扰试验（1）黄疸的影响，在不同程度的黄疸血清中加入AFP、CEA标准液，观察其对测定结果的影响。结果在胆红质浓度高达168μmol/L情况下，对化学发光法测定AFP、CEA无明显影响。（2）溶血的影响，在不同浓度的血红蛋白5g/L、10g/L、20g/L、40g/L中，分别加入A

6、FP、CEA标准液，观察测定结果，不受影响。（3）乳糜的影响，通过对乳糜血清脱脂前后AFP、CEA测定，观察脂血对化学发光法测定AFP、CEA的影响。结果在甘油三酯浓度高达29.05mmol/L情况下，对化学发光法测定无明显影响。   　　2.5线性试验将AFP测定值在1000～2000ng/L范围内五份血清混合，反复测定4次，取其均值作为原倍血清测定值即理论值。将此混合血清做5点倍比稀释，随机排列测定顺序，各复测4次，以原倍血清测定值为标准按稀释倍数算得理论值，并进行回归分析。Y=0.0612X+0.9999R=0.9999，AFP:0.30～1380μg/L范围内线性良好。同理求出C

7、EA的线性回归方程Y=1.8290X+0.9952CEA:0.51～1067μg/L范围内线性良好。    　　3讨论    　　本方法研究AFP、CEA检测结果表明，ACCESS型全自动微粒子化学发光免役分析系统采用经典的免役学原理，具有高度特异性，不受黄疸、脂血、溶血等因素影响。且以磁性微粒子为载体，最大限度扩大包被面积，以碱性磷酸酶标记抗原、抗体，采用最灵敏的发光底物AMPP，磁性微粒子包被技术的应用大大提高检测的灵敏度，使化