猪瘟疫苗制备

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1、猪瘟疫苗制备杨兴辉11级动物检疫3班11031080881.猪瘟简介猪瘟（HogCholeraVaccines，HCV）是一种急性、热性和高度接触传染的病毒性传染病。其发病特征为发病急，高热稽留和细小血管壁变性，引起全身泛发性小点出血，脾梗死。是一种对猪危害性极大的传染病，被国际兽疫局列为A类动物传染病[1]。在许多国家和地区，传统疫苗接种是控制猪瘟的重要手段。2.猪瘟疫苗的发展状况1903年DeSehweinitz和Dorset首次证明CSFV是一种滤过性病毒。1908年匈牙利HutyraKoves制成猪瘟高免血清后，人们一直用高免血清-血毒同时

2、肌注来免疫猪群。但由于高免血清昂贵，获取困难，加之血毒有散毒的危险，因此各国学者在以后的60年间相继研制出许多灭活疫苗。20世纪70年代，在佐剂和病毒培养技术发展的推动下，人们在研制出较为理想的灭活疫苗的同时，还研制出安全有效的猪瘟弱毒疫苗，并广泛应用于临床。1954年我国兽医药品监察所周泰冲等研究者，相继用4株猪瘟病毒(hogcholeravirus，HCV)分别诱发家兔感染，经过一系列的试验，终于选育出1株能够适应家兔的HCV，经兔体连续传代适应后发生变异，减弱对猪的致病力，却仍保持很强的免疫原性。用其制备的疫苗自1956年开始在全国推广应用，

3、对控制我国猪瘟（HC）的流行起到了决定性作用，并在国外广泛应用[2]。1956年全国推广兔化弱毒疫苗制成湿苗。1958年研制成功冻干疫苗。1965年，用猪瘟兔化弱毒疫苗接种牛，并感染牛的脾脏和淋巴结，可用来制造牛体反应苗。1974年用乳猪肾细胞培养猪瘟兔化弱毒获得成功，因而可利用大瓶旋转培养猪瘟兔化弱毒，制作冻干苗，对猪有效，但用猪肾同源细胞生产疫苗有带猪瘟强毒的危险性。1980年研制成功绵羊肾细胞苗。1982年和1985年又分别研制成功了奶山羊肾细胞苗和犊牛睾丸细胞苗。这些异源苗的研制不但提高了产量，而且在质量上也有所提高[3]。3.我国猪瘟疫苗

4、使用情况我国目前市场上使用的猪瘟疫苗主要有4种，即猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联苗，猪瘟细胞苗，猪瘟乳兔脾淋组织苗，猪瘟成兔脾淋组织苗等，其中免疫效果较好的有2种，即猪瘟活疫苗（II）———细胞苗、猪瘟活疫苗I———组织苗（成兔脾淋苗）。这2种疫苗现在已经是政府采购疫苗,被列入强免名单。4.猪瘟活疫苗制备工艺流程1.毒种1.1制造本品用的毒种为猪瘟兔化弱毒株；校检用强毒为猪瘟病毒石门系。1.2毒种标准猪瘟兔化弱毒株通过兔体继代，采集定型热反应兔的脾脏作毒种。脾毒应符合以下标准：（1）对家兔的感染性：将毒种用灭菌生理盐水作50倍稀释，耳静脉接种家兔4只，每

5、只1ml。接种后测温观察96小时，仅使家兔产生热反应，不致死家兔。（2）最小感染量：脾毒对家兔的最小感染量≤10-5/ml。（3）安全性：用灭菌生理盐水作10倍稀释，肌肉注射健康易感猪4头，每头5ml。接种后每日上、下午各测体温、观察一次，观察21日。体温、精神、食欲应正常。（4）免疫原性：脾毒对猪的最小免疫量为≤10-5/ml。（5）纯净：应无细菌、霉菌、支原体及外源病毒污染。（6）特异性：将毒种（疫苗）用灭菌生理盐水稀释成每1ml含有100个兔的最小感染量的病毒悬液，与等量的抗猪瘟病毒特异性血清充分混合，置10~15℃中和1小时，其间振摇2~3

6、次。同时设立阳性对照（病毒对照）和阴性对照组（生理盐水）。中和结束后，分别接种家兔2只，每兔耳静脉注射1ml，观察体温。除阳性对照组应出现热反应外，其余两组在接种后120小时内不引起热反应。（7）基础种子代数：为478~490代。（8）毒种保存-70℃保存期为10年；在-30℃保存期为5年。2.生产用毒种制备2.1毒种繁殖2.1.1家兔的选择选用营养良好，体重1.5~3kg家兔。购入家兔应隔离饲养观察30日以上。家兔接种前，至少应测温观察3日，每日上、下午各测温一次。选用体温正常、体温波动不大的家兔。2.1.2接种将冻干毒种用灭菌生理盐水制成50倍

7、稀释的乳剂，每兔耳静脉注射1ml。2.1.3测温观察家兔接种后，上、下午各测温一次，24小时，每隔6小时测体温一次。2.1.4热型判定接种家兔的体温分为四类：（1）定型热反应（++）潜伏期24~48小时，体温上升呈明显曲线，超过常温1℃以上，至少有3个温次，并稽留18~36小时。（2）轻热反应（+）潜伏期24~72小时，体温上升有一定曲线，超过常温0.5℃以上，至少有两个温次，稽留12~36小时。（3）可疑反应（±）潜伏期不到24小时，或超过72小时，或超过72小时以上，体温曲线起伏不定，或稽留不到12个小时，或稽留超过36小时而不下降。（4）无反

8、应（－）体温正常者。注：常温家兔接种前3日所测体温的平均温度。潜伏期：由接种时算起，到体温上升超过常温0.5℃以上的间隔时