01-杨青-隐球菌实验室诊断方法探讨

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1、隐球菌实验室诊断方法探讨浙江大学医学院附属一院传染病诊治国家重点实验室杨青隐球菌病是新生隐球菌感染所致的全身感染性疾病，好发于细胞免疫功能低下患者，但可以侵犯正常人。主要侵犯中枢神经系统和肺部，亦可原发或继发于皮肤、粘膜、骨骼和肝脏等组织新型隐球菌国外我国•较早发现艾滋病的地区，隐球菌•隐脑发病以散发、非AIDS人群为的发病率约为5/10万主，起病常隐匿，•在AIDS患者中感染率高达30%1,2•表现为慢性或亚急性过程，初起症状多不明显，无特征性31.KethireddyS,etal.DrugMetabToxicol.2007;3(4):573-81.2.BicanicT,e

2、tal.BrMedBull.2004;72:99-118.3.揭育胜等.广东医学.2008;29(6):888-891.共8769例Yuchong,C.,etal.Mycopathologia,2012.173(5-6):p.329-35.浙大一院2013-2105年98例隐球菌患者（培养阳性）4034353025201816161591043350其中肾移植患者10例，肝脏移植2例实验室诊断墨汁染色培养新型隐球菌荚膜多糖抗原组织病理贵院诊断隐球菌病常用的方法是：A.墨汁染色B.培养C.新型隐球菌荚膜多糖抗原D.组织病理墨汁染色•阳性率60-70%•发病早期病原学检出率低

3、，穿刺部位对检出阳性率也有影响，隐球菌主要集中在脑膜或脑室脉络丛肉芽肿中细胞内•工作人员经验痰液革兰染色镇海七院曹丽君老师提供小腿脓腔脓液革兰染色温附一吴庆老师提供培养•血液、脑脊液、肺泡灌洗液、组织等•不含放线菌酮的培养基•肉汤增菌新型隐球菌荚膜多糖抗原检测乳胶凝集试验：•以乳胶颗粒作为载体的一种间接凝集试验。即吸附新型隐球菌荚膜多糖抗原于其表面，特异性抗体与之结合后，产生凝集反应阳性阴性胶体金法利用免疫层析技术，以胶体金标记单克隆抗体，可以检测新型隐球菌的全部四种荚膜多糖抗原（A-D）胶体金比乳胶凝集灵敏度更高ClinVaccineImmunol.2013;20(4):6

4、34-5.NewMicrobesNewInfect.2015Mar;4:1–4ELISA方法：定量检测丹娜公司产品：新型隐球菌荚膜多糖检测试剂盒（ELISA法）PREMIER公司产品：17隐球菌脑膜炎中的应用•李娟等报道墨汁染色涂片诊断隐球菌脑膜炎灵敏度61.1％（11/18),脑脊液真菌培养灵敏度38.9％(7/18),隐球菌抗原检测灵敏度100％(18/18)，特异度99.4%(149/150)•刘正印等报道墨汁染色阳性23例(23/26,88%)，乳胶凝集试验抗原阳性20例(20/20，100%)，培养阳性8例(8/13,62%)•大多数研究报道灵敏度93–100%，特异

5、性93–98%李娟,吕晓菊,等.四川大学学报（医学版）,2010,41(6):1074-1075,1079刘正印,王爱霞,等.中华内科杂志,2002,41(8):541-543Antinori,S.;Radice,A.;JClinMicrobiol,2005,43(11):5828-5829Lu,H.,etal.JClinMicrobiol,2005.43(6):p.2989-90.肺隐球菌病中的应用•陈先汉等报道28例肺隐球菌病27例乳胶凝集试验阳性（96.4%），而活检肺组织培养或痰培养隐球菌阳性分别为4例(14.2%)和1例(3.6%)•王琴等报道55例社区获得肺隐球菌病，

6、25例患者行隐球菌乳胶凝集试验阳性率100%.痰真菌培养、活检组织培养和气管镜吸出物培养阳性分别为1例、4例和2例中国医师杂志,2011,13(3):364-366微生物与感染,2011,06(3):144-1482000年7月-2007年7北京大学第一医院疑诊为肺隐球菌病27例（均为非AIDS患者），均行血清乳胶凝集试验和肺活检组织病理检查中华结核和呼吸杂志,2008,31(5):360-363结果：9例肺活检确证隐球菌病，乳胶凝集试验均阳性，18例非肺隐球菌病均阴性；3例脑脊液乳胶凝集试验其中1例阳性，颅内压增高；5例GM试验，1例高滴度阳性，表现为重症肺炎；2例G试

7、验均阴性。4例患者乳胶凝集试验持续阳性时间分别为2、5、6和12个月，肺部病灶消失的时间分为1、4、5和10个月，1例肺内病灶长期不吸收，乳胶凝集试验持续阳性。90例HIV阴性患者肺隐球菌病的诊断分析LA阳性率64.6%（31/48)，其中14例入院即考虑隐球菌病行乳胶凝集试验阳性12例（85.7%），痰液和BALF培养均阴性赵宇等.中国呼吸与危重监护杂志,2012,11(6):541-544•假阴性前带效应：少见，抗原滴度过高，稀释测定肺部感染•假阳性与类风湿因子、白吉利毛孢