《基因诊断》PPT课件

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1、第10章基因诊断www.themegallery.comContents基因诊断概念、策略1基因诊断技术2直接基因诊断3间接基因诊断（连锁分析）4www.themegallery.comLOGO第一节基因诊断概念、应用技术第二节基因诊断方法及实例www.themegallery.comLOGO基因诊断：利用分子生物学技术从DNA水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷，又称DNA分析法。传统的疾病诊断：表现型→基因型基因诊断：基因型→表现型（逆向诊断）www.themegallery.comLOGO基因诊断的优势和意义：1不受材料来源影响----微量外周血、活

2、体穿刺组织、孕妇羊水绒毛、男性精斑等2症状前诊断尤其对于一些延迟显性疾病如Huntingtong舞蹈病3产前基因诊断避免遗传病患儿出生，提高人口质量www.themegallery.comLOGO第一节基因诊断技术Southern-blotNorthern-blotwww.themegallery.comLOGO基因诊断技术斑点杂交点样Probe-32P检测AB1234斑点杂交or等位基因特异性寡核苷酸_www.themegallery.comLOGO基因诊断技术荧光原位杂交www.themegallery.comLOGO基因诊断技术荧光原位杂交www

3、.themegallery.comLOGO基因诊断技术聚合酶链反应www.themegallery.comLOGO基因诊断技术☆多重PCR在一个PCR体系中加入数对PCR引物，覆盖区域不重叠用于检测同一基因多个外显子的缺失E1E2E3PCR为基础的诊断技术www.themegallery.comLOGO基因诊断技术☆RT-PCR以mRNA为模板，经逆转录酶合成cDNA用于研究基因表达使微量mRNA迅速扩增，提高mRNA检出的灵敏度☆实时定量PCR（real-timePCR）☆PCR-DGGEwww.themegallery.comLOGO基因诊断技术☆

4、PCR-SSCP（SingleStrandConformationPolymorphism）单链DNA由于碱基序列不同可引起构象差异，这种差异将造成相同或相近长度的单链DNA电泳迁移率的不同。据此，可用于DNA中单个碱基的替代、微小的缺失或插入的检测。www.themegallery.comLOGO基因诊断技术---------------------------primer---------------------------↓32P-dNTP掺入PCR扩增产物↓变性↓单链DNA↓中性聚丙烯酰胺凝胶电泳↓12345自显影↓1为正常结果分析2、4、5为

5、纯合患者3为杂合子.PCR-SSCP技术应用举例：www.themegallery.comLOGO测序：dHPLC基因诊断技术www.themegallery.comLOGO基因诊断技术生物芯片www.themegallery.comLOGO筛查基因突变的方法比较方法优点缺点Southern-blot大的缺失和重排费力，费事，消耗DNA多PCR-SSCP简单、廉价适用于200bp以内DNA片段突变筛查，不显示突变位置定量PCR检测杂合子缺失昂贵dHPLC迅速，高通量，定量设备昂贵，不能显示突变位置测序、芯片高通量，突变可定性昂贵检测已知基因突变的方法点

6、突变：酶切，测序，ASO，测序缺失、插入：Southern-blot，测序,多重PCR重复：酶切，测序www.themegallery.comLOGO第二节基因诊断方法及实例直接诊断——直接检测致病基因的突变基因突变类型——缺失、点突变、重复、插入等间接诊断——应用DNA多态为遗传标记进行连锁分析，确定待测者是否得到带有致病的染色体，从而间接地作出诊断利用遗传标记DNA多态——RFLP、VNTR、SNPwww.themegallery.comLOGODNA分析中常用的遗传性多态性标记：限制性片段长度多态性(RestrictionFragmentLeng

7、thPolymorphism,RFLP)：较大片段的插入／缺失，或碱基变异导致限制酶切点消失／出现→酶切后产生不同长度的DNA片段。可变数目串联重复(Variablenumbertandemrepeats,VNTR)：重复序列首尾相连，重复单位6-25bp→小卫星DNA；2-6bp→微卫星DNA；酶切／PCR扩增后可产生长度差异；等位基因多，杂合度高。单核苷酸多态性(Singlenucleiotidepolymorphism,SNP)：单个核苷酸的替代、缺失或插入，基因组中含量丰富。www.themegallery.comLOGO二、直接基因诊断及实例

8、直接检测致病基因本身的异常。通常使用基因本身或邻近DNA序列作为探针，进行Southern杂交