《高效液相色谱基础》PPT课件

《《高效液相色谱基础》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、高效液相色谱仪基础福立分析仪器有限公司液相色谱基础常见的分离方式化学物质成分的定性和定量分析离不开分离，我们常见的分离方式有以下几种：蒸馏、离心、电泳、过滤、色谱等，其中色谱分离是最重要和有效的手段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相(stationaryphase)时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。液相色谱基础本世纪初，俄国科学家茨维特（M.S.Tswett）提出经典液相色谱法后，色谱分析法取得了迅速的发展，30～40年代发展了柱分配

2、色谱、纸色谱，50年代发展了气相色谱法、薄层色谱法，60年代发展了凝胶色谱法、高效液相色谱法70年代发展了高效毛细柱气相色谱法，80年代发展了毛细管电泳、电色谱，90年代出现了光色谱。液相色谱基础茨维特实验的原形×1906年茨维特用右边图示的实验装置使用液体淋洗的办法实现了多种物质的分离从而确立了色谱分析法。从此这个实验方法就成为：经典液相色谱法时至今日这种方法还被广泛地应用着。×随着科学技术的发展，科学工作者改进了液相色谱柱的填料，从而就出现了高效液相色谱分析。×几种英文缩写的解释：HPLC－HighPerformanceLiquidChromatograghyHPLC－HighPres

3、sureLuquidChromatograghyHSLC－HighSpeedLiquidChromatograghyHRLC－HighResolutionLiquidChromatograghy液相色谱基础HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：★高压-压力可达15～30Mpa。★高速-流速为0.1～10.0ml/min。★高效-可达每米5000塔板以上。在一根柱中同时分离成份可达100种。★高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：★速度快-通常分析一个样品在15～30min，有些样品甚至在5min内即可完成。★分辨率高-可选择固定

4、相和流动相以达到最佳分离效果。★灵敏度高-紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。★柱子可反复使用-用一根色谱柱可分离不同的化合物。★样品量少，容易回收-样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。液相色谱基础高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较高效液相色谱法经典液相色谱法柱长：10～25cm10～200cm口径：2～10mm10～50mm粒度：5～50um（2500目～300目）75～600um（200目～30目）柱压力：2～20MPa0.001～0.1MPa柱效：2×103～5×104/m2～50/m进样量：10-6～10-2g1～10g分析时间：3分钟～

5、1小时1～20小时液相色谱基础基本概念和术语1．色谱图和峰参数★色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elutionprofile)。★基线(baseline)--经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。★噪音(noise)--基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。★漂移(drift)--基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。★色谱峰(

6、peak)--组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）不对称色谱峰有两种：前延峰(leadingpeak)和拖尾峰(tailingpeak)。前者少见。液相色谱基础基本概念和术语色谱图液相色谱基础★拖尾因子(tailingfactor，T)，用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子(symmetryfactor)或不对称因子(asymmetryfactor)。《中国药典》规定T应为0.95～1.05。T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。★峰底-基线上峰的起点至终点的距离。★峰高(peakheight，h)

7、-峰的最高点至峰底的距离。★峰宽（peakwidth，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W＝4σ★半峰宽（peakwidthathalf-height，Wh/2)-峰高一半处的峰宽。Wh/2＝2.355σ★标准偏差（standarddeviation，σ)-正态分布曲线x＝±1时（拐点）的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小，分散程度