细胞培养箱消毒使用和维护

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1、细胞室二氧化碳培养箱的消毒使用和维护体外培养的细胞和体内细胞一样，不仅需要营养物质，更需要一个稳定的生活环境，如温度、CO2浓度、湿度等，二氧化碳培养箱则是最佳选择。二氧化碳培养箱是在普通培养的基础上通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞在生物体内的生长环境，如合适的温度（37°C）、恒定的CO2水平（常用5%）、稳定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、较高的相对饱和湿度（常用95%），来对细胞或组织进行体外培养的一种装置。其用途甚广，主要用来培养细胞、组织和某些特殊微生物，为它们提供一个良好的体外环境，广泛应用于细胞学实验、微生物学实验、组织学实验以及分子生物

2、学实验。因此，CO2培养箱的消毒和维护尤为重要。　　1、二氧化碳培养箱的污染　　凡混入CO2培养箱(细胞培养环境)中，对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染。细胞持续在污染环境中生长时，轻者细胞生长缓慢，细胞分化变形，较重的细胞增殖停止，从瓶壁脱落，甚至死亡。不同的污染物对细胞的影响也有差别，有的影响是长期、缓慢和潜在的，而有的则能在很短的时间内抑制细胞生长或产生有毒物质杀害细胞。根据污染源不同主要可以分为：生物性污染、化学性污染、物理性污染和气溶胶污染。　　1.1 生物性污染：这是最常见也是危害最大的污染。如细菌、病毒、真菌，支原体等。这些污染源

3、有可能是人为带入，或是细胞在放入培养箱前已经受污染，再或者是箱体本身没有消毒干净。体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，而培养基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也是有限的，因而细胞微生物污染一旦发生往往是无法挽救的。　　1.2化学性污染：培养箱中许多化学物质都可以引起细胞污染。如细胞培养容器清洗过程中残留的洗涤剂、加湿器中未纯化的水、人为带入的液体或气体都可能成为化学性污染的来源。不同化学物质对细胞污染是不一样的，有的可能促进或抑制细胞生长，有的甚至杀死细胞。　　1.3 物理性污染：培养环境中的物理因素，如温度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响

4、。物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染，其主要是在代谢水平或分子水平上，影响细胞正常的生理过程。　　1.4气溶胶污染：气溶胶是液体或固体微粒均匀地悬浮在气体介质中的分散体系，当微粒是微生物时，就是微生物气溶胶，如果这种微生物是病原性的，就是病原微生物气溶胶。细菌、病毒等病原体通过气溶胶可在人与人、人与环境之间传播。微生物气溶胶可分为两大类：一类是飞沫核气溶胶，另一类是粉尘气溶胶。医学实验室内许多操作都可以产生气溶胶，并且大多可能是病原微生物形成的感染性气溶胶，由于其气溶胶分子小，漂浮在空气中、粘附于人身上，易在空气中扩散而污染实验室的空气。　　2、

5、CO2培养箱污染防控措施　　2.1CO2培养箱的选择：二氧化碳培养箱的制造商们设计了多种不同的装置去减少和防止污染的发生，其主要是防污染设计和消毒灭菌系统的改进，以达到消毒灭菌的目的。如带有紫外消毒功能的CO2培养箱、带HEPA过滤器的CO2培养箱，以及带高温消毒的CO2培养箱等，后者又分为高温干热和高温湿热两类。这些装置的灭菌能力各有千秋，紫外灯消毒范围有限，距离灯越远，消毒能力越差。HEPA过滤器的过滤膜孔径有限，无法去除病毒和一些微小细菌，并且容易损耗，也有其局限性。相比而言，高温消毒则是比较有效的方法。而高温干热和高温湿热也有所不同，由于蒸汽潜热大、穿透

6、力强，容易使蛋白质变性或凝固，因此高温湿热的灭菌效率比干热灭菌法高。　　2.2提高素质：人为因素和态度可以对环境、人和物起到一个正面或负面的影响。以安全为目的，实验室内的工作人员应明白自身的态度和人为因素对实验环境的重要性。因此，对实验室工作人员进行专业培训，特别是进实验室前的培训，并且定期进行考核检查是十分必要的。　　2.3重视管理：细胞室内的培养箱应由专人负责管理，定期对系统进行校正，至少每年一次。各项数值一旦固定后，不要随意调节，以免影响箱内温度、湿度、CO2浓度的波动，降低机器的灵敏度，同时还会影响培养箱内的细胞生产状态。使用前，对培养箱的各项指标进行系

7、统校正，并且对箱体和内部进行消毒处理，等各项数值稳定一段时间后方可使用。一旦出现紧急问题，应及时上报，应由专业的人员进行操作，马上采取应对措施，以免造成不必要的损失。 　　2.4规范操作：培养箱的使用虽然很简单，但同样需要规范操作。进细胞室必须穿着实验服（白大褂），换上拖鞋或者穿一次性的鞋套。实验操作时必须带一次性手套，特别是打开培养箱前，必须先用75%的酒精喷壶喷洗双手再开培养箱，再取出细胞培养瓶或培养板。显微镜下查看细胞培养瓶或培养板后，再放回培养箱时，同样也要喷酒精消毒。培养箱的两个门开关取（放）物要迅速，不可长时间开着，否则会影响CO2的浓度、温度和湿度

8、，以及造成污染。尤其是不