蚯蚓横切片的制作

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1、蚯蚓横切片的制作目的了解切片标本制作的基本知识，学会几种制作方法。实验前的思考制作切片标木，步骤繁多，其中特别是脱水这一环节非常重要，如果脱水的时间过短或乙醇浓度不足，组织块中的水分不能完全脱掉，当组织块浸在透明液——二甲苯中，便不能透明，并使以后浸醋时石蜡难以透入，切片不能成功。材料器具蚯蚓；剃刀(或双面刀片)，玻璃缸，卫生纸，吸水纸；琼脂(洋菜)，70～100％等级乙醇，蒸馏水，自来水，0.1～0.2％氨水，1％盐酸乙醇，二甲苯，苏木精染色液，伊红染色液，波因(Bouin)氏固定液*。步骤1．取一玻璃缸，缸底垫几层湿卫生纸，然后取较小的蚯蚓放入缸中，

2、缸上加盖，以免蚯蚓爬出。在缸中放入一些琼脂胶冻作食料进行喂养，目的是使它把消化道内的泥沙排尽。排出的泥沙在湿草纸上，因此每天须换一次湿草纸。泥沙排尽后身体显现透明时，就可以固定。2．把培养的蚯蚓浸入波因氏固定液中固定2～4小时，然后用剃刀或双面刀片切取它身体中部的一段，再切成0.5厘米长的若干小段，接着继续用波因氏固定液固定4～8小时。13．用70％乙醇浸洗，除去因固定液而染上的黄色。4．等级乙醇脱水→透明→透蜡→包埋→切片→贴片→烤干→溶蜡→加水。*波因氏固定液的配制75毫升苦味酸饱和水溶液中加入25毫升甲醛，在临用时再加入5毫升冰乙酸。5．把切片从蒸

3、馏水中取出后，投入德氏(Delafield’s)苏木精中染色5～10分钟。苏木精是专染细胞核用的。取出后切片是深紫红色的，用自来水或弱碱性水浸10分钟左右使切片碱化(蓝化)，切片颜色呈深蓝色。用1％盐酸乙醇分化数秒钟，再用自来水碱化切片1小时至数小时。这时，切片又恢复呈蓝色。6．从染色液中取出后，需要先经过蒸馏水迅速浸洗2次，以洗去玻片上多余的红色(在蒸馏水中不能停留太久，否则会使组织上的红色完全褪掉)。然后依次浸入伊红乙醇液，第1瓶95％乙醇(2～5分钟)→第2瓶95％乙醇(2～5分钟)→第1瓶无水乙醇(2～5分钟)→第2瓶无水乙醇(2～5分钟)→1∶

4、6石碳酸二甲苯或1∶1的无水乙醇二甲苯，脱水完毕。7．经脱水的切片，浸入第1瓶二甲苯中(5～10分钟)，再浸入第2瓶二甲苯(5～10分钟)，使组织透明，置于载玻片上。8．用吸水纸把组织四周多余的二甲苯擦去，滴一点树胶在组织上，加盖盖玻片。注意事项1．保存生物显微玻片标本不能把玻片标本放在阳光下曝晒，以免2褪色。2．不要把玻片标本互相重叠放置，应该隔开平放，以免粘连。最后放在切片盒中。3．不要把玻片标本放在太热和太潮湿的地方，更不要沾水。4．拭擦玻片标本时，要轻轻擦，不要用力擦，否则因胶未完全干涸，会移动盖玻片。分析和讨论1．用自来水碱化苏木精染色的细胞主

5、要是加强染色化合物固着的作用。一股以用自来水碱化切片较为合适，如果自来水碱化力太弱，可以用0.1～0.2％氨水，但是这样碱化的切片，必须再用自来水充分浸洗。以上的染色步骤只能染出细胞核，要使细胞质着色，还需用伊红染色。伊红染色剂有水溶性和乙醇浴液两种，因此染色步骤也有些差异。2．如果用伊红的水溶液染色，须把切片从普通水中取出后，投入蒸馏水中浸洗片刻，然后投入伊红的水溶液中染色5～10分钟。3．如果用伊红的乙醇溶液染色，须在切片从普通水中取出后，投入蒸馏水中浸洗片刻，然后再经过95％乙醇浸2～5分钟，才可以投入伊红乙醇溶液中染色，也染5～10分钟。3