《基因克隆载体》PPT课件

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1、第三章基因克隆载体第三节染色体定位整合克隆载体质粒与病毒克隆载体的不足：1、外源DNA的不稳定性2、外源DNA插入染色体DNA位点的随机性基因整合平台系统——基因定位同源重组(基因打靶)整合平台：即受体细胞基因组上给定的DNA区域，是外源DNA定位整合的位置定位整合克隆载体：除一般质粒克隆载体必备的元件外，还含有一个或两个与整合平台DNA区域核酸序列同源的DNA片段（长度最好＞1kb）一、定位整合克隆载体的几种模式（一）内源平台双交换置换克隆载体（二）外源平台双交换置换克隆载体（三）内源平台双交换插入克隆载体（四）内源平台单交换插入克隆载体二、定位整合效

2、率与受体细胞的种属和同源DNA片段的长短有关整合效率偏低，有待改进三、定位整合克隆载体受体生物：原核生物蓝细菌、高等植物（拟南芥、水稻等）的原生质体、动物鼠的胚胎干细胞、人的细胞整合平台：内源isiAB、cpcB2A2、hprt、rDNA外源hptΔ、aphⅡ（一）蓝藻染色体定位整合克隆载体1、丝状蓝藻Calothrixsp.PCC7601获得含藻蓝蛋白基因cpcB2A2的DNA片段，以之为同源序列，构建～2、从其cpc2操纵子中扩赠出cpc2启动区（约0.6kb）、同源DNA片段L（约1.2kb）和R（约1.15kb）构建如下载体：3、Synechoc

3、occus从sp.PCC7942获得含isiAB基因的约1.5kb的DNA片段，构建pZL：不含蓝藻源质粒复制起始位点，故不能在蓝藻细胞质中自行复制（二）酵母菌染色体定位整合克隆载体（三）植物染色体定位整合克隆载体易于控制；避免插入失活或突变。（四）动物染色体定位整合克隆载体第四节人工染色体克隆载体一、人工染色体克隆载体含义和特点“穿梭”克隆载体：含有质粒克隆载体所必备的第一受体（大肠杆菌）源质粒复制起始位点（ori），还含有第二受体（如酵母菌）染色体DNA着丝点、端粒和复制起始位点的序列，以及合适的选择标记基因。特点：能容纳长达1000至3000kb的

4、外源DNA片段。二、人工染色体克隆载体的构建YAC（酵母人工染色体）常用载体：pYAC3、pYAC4、pYAC5三、人工染色体克隆载体的应用构建基因组文库基因治疗基因功能鉴定作业列举所学的几种重要克隆载体的定义。各种载体的特点是什么？列举质粒和噬菌体克隆载体构建的基本策略。简述使用cosmid载体的基本程序。