《基因药物分析》PPT课件

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1、第十三章生化药物和基因工程药物分析概念第一节概述什么是生物药物利用生物体、生物组织或器官等成分，综合运用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学合药学的原理与方法制得的药物。广义的生物药物包括各种天然生物活性物质以及人工合成或半合成的天然物质类似物。生化药物Biochemicaldrugs生物技术药物Bio-technologydrugs生物制品Biologicalproducts生物提取物生物-化学半合成现代生物技术什么是生化药物和基因工程药物？生物药物生命基本物质及其衍生物、降解物、结构修饰物

2、等运用生物技术进行新药研发如基因工程药物生物技术生物材料制备什么是基因工程药物（Geneticengineeringdrugs）？功能蛋白预防、治疗某种疾病调控基因的分离、纯化或人工合成控制蛋白合成DNA重组技术可大量生产的受体细胞导入细菌、酵母菌、动植物及其细胞基因的繁殖表达发现生化药物和基因工程药物的种类生化药物基因工程药物氨基酸、多肽、蛋白质酶类与辅酶类多糖类脂质类核酸及其降解物、衍生物主要成分为多肽或蛋白质激素类及神经递质类细胞因子类酶类及凝血因子类…生化药物和基因工程药物的特点来源均为生物体

3、，并都具一定的生物活性和生物功能；治疗疾病的针对性强、毒副作用小、易为人体吸收；分子量大，且往往不是定值；结构确证难；质量对多种因素敏感，需进行全程质量控制；需进行生物活性检查、安全性检查、效价检查等；第二节质量检验的基本程序与方法理化鉴别法生化鉴别法生物鉴别法化学鉴别法UV光谱法HPLC法显色、沉淀等肽图谱酶法电泳法脱盐后等电聚焦法利用酶的专属性利用带电荷差异利用等电点差异利用生物体进行试验来鉴别药物1.鉴别2.杂质检查一般杂质检查：原料药的检查同化学药物多糖类：检查低聚糖、核酸、蛋白质等；特殊杂质

4、检查：酶类：酶催化反应基本产物分析，相关酶的检查；（生化药物）基因工程药物的生产涉及到生物材料和生物学过程，因此可能会存在很多传统生产方法不可能存在的有害杂质。生产过程中杂质的检查（尤其是基因工程药物）基因工程药物质量控制必须结合最终产品、有效的中间测试以及有效的方法来去除可能的杂质。如：原核细胞中表达的产品可能含有内毒素、致敏原如：动物细胞中表达的产品可能含有DNA杂质或病毒3.安全性检查热原和细菌内毒素检查法过敏试验——检查异性蛋白：有可能存在异性蛋白的药物应作过敏试验。异常毒性试验（异常毒性检查

5、法）：用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种试验动物，观察其急性毒性反应。反应的判断以试验动物死亡与否为终点。降压物质检查法：降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。无菌检查法——检查药品及敷料是否染有活菌：无菌检查指示控制制品染菌状况的一种检测手段。要使药品真正达到无菌，首先应严格执行GMP管理制度。致突变试验生殖毒性试验可能的杂质：残留DNA、宿主细胞蛋白质、内毒素、蛋白质突变体和蛋白裂解物等基因工程药物中可能的杂质与污染物

6、检查可能的污染物：微生物、热原和病毒等4.含量（效价）测定含量测定效价测定（％）(生物效价或酶活力单位）HPLC法适用对象：结构明确的小分子或水解后变成小分子的药物酶类或蛋白质药物测定：以体内或体外法测定参考品的生物学活性SDS-PAGE法(蛋白质)同时测定蛋白质含量，计算特异比活性，以单位数/毫克蛋白（IU/mg）标示第三节常用定量分析方法及其应用主要包括理化分析法、生化测定法和生物检定法一.理化分析法化学分析法：光谱分析法：色谱分析法：重量法、容量法、电化学分析等比色法，紫外、荧光分光光度法等高效

7、液相，灌注色谱等重量法：根据样品中分离出的单质或化合物的重量测定所含成分的含量。1．提取法：用适宜的溶剂提取出样品中的某种成分，再蒸去溶剂进行测定。2．挥发法：利用被测组分具有挥发性，或将它转化为挥发性物质来进行含量测定的方法。3．沉淀法：利用沉淀反应，将被测组分转化成难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，然后经过滤、洗涤、烘干或炽灼，最后称重并计算其含量的方法。化学分析法：重量法、滴定分析、电化学分析滴定分析法：根据样品中某些成分与标准溶液能定量地发生酸碱中和、氧化还原或络合反应等进行测定例：用电位滴

8、定法测定L－盐酸精氨酸含量；胰淀粉酶的效价测定：以淀粉为底物，经淀粉酶水解后产生还原糖，在碱性溶液中还原糖又将斐林试剂中的Cu2＋还原成Cu＋，多余的Cu＋在酸性溶液中与KI作用析出碘，然后用硫代硫酸纳滴定所析出的碘，来推算糖的含量，进而标定淀粉酶的效价。电化学分析法——离子选择性电极分析法：电极借助敏感膜对某一离子产生选择性的响应。比色法：样品与显色剂可发生颜色反应，依颜色反应的强度测定含量。光谱分析法例：用比色法测定硫酸软骨素的含量原理：样品先用盐酸