多肽、蛋白质药物1

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1、一、多肽药物及其生产工艺多肽类药物多肽激素：垂体多肽激素、促皮质激素、促黑素、脂肪水解素、催产素、加压素甲状腺激素：甲状旁腺激素、降钙素胰岛激素：胰高血糖素、胰解痉多胃肠道激素：胃泌素、肠血管活性素、抑胃肽胸腺激素：胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子含有多肽成分的其他生化药物骨宁、眼生素、血活素、氨肽素、蜂毒、蛇毒、胚胎素、花粉提取物、心脏激素等１、多肽类药物——胸腺素的制备用途：原发性和继发性免疫缺陷病，如反复上呼吸道感染;自身免疫性疾病，如肾病、红斑狼疮、类风湿关节炎、重症肌无力;变态反应性疾病，如支气管哮喘；细胞免疫功能减退的中老年人和老年人疾病，并可抗衰老；肿瘤的辅助治疗。黄海葵强心肽A（A

2、P—A）的制备海洋生物中有许多含有多肽或蛋白质毒素往往具有特殊的药物功能。如海葵毒素等的强心功能，棘皮、软体等动物的抗癌肽的抗癌功能等。黄海葵强心肽就是其中一种。人们已从黄海葵中分离出具有强心作用的黄海葵强心肽A、B、C。AP—A由49个氨基酸组成，Mr为5500，属碱性多肽。２、黄海葵毒素的制备二、蛋白药物及其生产工艺蛋白质药物蛋白质激素：垂体蛋白质激素（生长素、催乳激素、促甲状腺激素、促卵泡激素）、促性腺激素（人绒毛膜促性腺激素、血清性促性腺激素）、胰岛素及其他蛋白质激素（胰岛素、胰抗脂肝素、松弛素）血浆蛋白质：白蛋白、纤维蛋白溶酶原、血浆纤维结合蛋白、多种免疫球蛋白、纤维蛋白原、抗凝血酶

3、III、凝血因子VIII和IV。蛋白质类细胞生长调节因子：干扰素(IFN)、白细胞介素(IL)、神经生长因子、肝细胞生长因子、血小板生长的生长因子、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、组织纤溶酶原激活因子（tPA）、促红细胞生成素(EPO)等胶原蛋白：明胶、阿胶蛋白酶抑制剂：蛋白质药物－白介素2的动物细胞制备作用：白细胞介素－2（IL－2）能诱导T细胞分泌－干扰素，增强杀伤细胞的活性，在调整免疫功能上具有重要作用。临床用于治疗一些免疫性疾病，如艾滋病、原发性免疫缺损、老年性免疫功能不全以及癌症的综合治疗。对创伤修复也有一定的作用。工艺路线工艺过程①诱生用鸡瘟病毒刺激人外周血白细胞，37℃培养。②病毒

4、灭活和固液分离用6mol/LHCI调节pH2.0~2.5，再用6mol／LNaOH调节pH7.2～7.4，离心除去变性杂蛋白。③硫酸按分级沉淀取上述离心后的培养上清液，加饱和硫酸按至35％饱和度，24h离心弃去沉淀。上清液补加固体硫酸按至85％饱和度，4℃静置24h离心，收集沉淀。④除盐将沉淀溶于pH6.5、10mmol／LPBS中（内含2％正丁醇和0.15NaCI）。透析24h（更换5次透析外液）。⑤蓝色琼脂糖层析将上述透析内液通过Sepharose4B层析柱，用200mlPBS去不吸附的蛋白，再用含0.4mol/LNaCI的PBS洗涤亲和柱，最后用含1.0mol／LPBS解吸IL－2活性组

5、分。⑥凝胶层析将解吸的IL－2活性组分经PEG（MW6000）浓缩，再上ACA44UItrogel层析柱。柱用含0.1％PEG、2％正丁醇和pH7.6的0.2mol／L甘氨酸的Tris.HCI洗脱，得IL－2。转基因白细胞介素制备重组酵母基因表达转化小鼠细胞筛选单克隆抗体表达重组大肠杆菌表达细胞分离细胞破碎包含体溶解-分离-脱盐-浓缩白细胞介素大肠杆菌表达的纯化方法基因重组大肠杆菌于LB培养基(含氨苄青霉素)37oC震荡培养过夜次日按1:100比例稀释继续扩增至OD600=0.4左右加诱导剂IPTG,(异丙基－b-d-硫代半乳糖苷)至终浓度2mmol/L,在30oC下诱导6小时,收集表达IL-

6、18菌体.收集菌体加细胞裂解液,用超声波破碎菌体.25000g离心30分钟沉淀于6-8mol/L的盐酸胍或脲溶解包含体,透析或直接稀释40-50倍以创造蛋白质再折叠的条件.然后用一般蛋白质的分离方法即可.