实验三植物不定芽诱导与快繁技术

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1、第四章器官培养宜职院08.9目的与要求了解离体根培养的实践意义，掌握离体根的培养方法，熟悉离体根培养的培养基配方。了解植物茎尖培养的意义，掌握茎尖培养的方法，以及茎尖微繁技术。掌握叶培养概念，离体叶组织培养方法，了解影响叶片组织脱分化和再分化因素。具有植物离体根培养的认知和进行根培养的基础能力，具有熟练进行植物茎尖培养和茎段培养的能力，具有叶培养认知和进行叶培养的基础能力。一、根培养的实践意义1、是进行根系生理代谢研究的最优良试验体系。2、是研究器官分化、形态建成的良好体系。3、建立快速生长的根无性系，对药物生产有重要意义。4、对根细胞培养物进行诱变处理，可筛选突变体，用

2、于育种实践。第一节根的培养二、离体根的培养方法1、培养步骤：离体根培养的第一步是要获得无性繁殖系。方法如下：种子表面消毒——无菌条件下萌发——根伸长后切取1.0cm长的根尖——接种于培养基——侧根生长——切取侧根的根尖扩大培养——获离体根无性系胡萝卜根培养2、一般方法100ml三角瓶，内装40-50ml培养液，如长时间培养，可采用大型器皿500-1000ml培养液的发酵瓶进行培养。根据需要可在瓶中添加新鲜培养液继续培养或分割转移后继代培养。为避免培养过程中培养基成分变化对生长的影响，可采用流动培养方法。2、根瘤菌结瘤实验的特殊方法Raggio1965年等设计了离体根的结瘤

3、实验装置。此装置由两个部分组成，下部是试管，管中装有含无机盐的营养液，并接种根瘤菌，上部是玻璃盖，盖中有一单向开口的管状凹槽，槽中盛放含有有机化合物的琼脂固体培养基。故有机营养从根基部吸收，无机营养从根尖吸收。Bunting和Horrocks1964年修改了Raggio等的装置，变为在粗沙中提供无机盐。利用这一技术研究菜豆、大豆等离体根根瘤菌的固氮情况，结果表明这些根瘤菌含有血红蛋白，并能固定大气中的氮。Raggio装置三、离体根培养所用的培养基离体根培养多用无机离子浓度低的White培养基或其他培养基，MS、B5等也可采用，但必须将其浓度稀释到2/3或1/2。苜蓿离体根

4、的培养液和西红柿离体根的培养液如下：成份苜蓿浓度(mg/L)西红柿浓度(mg/L)Ca(NO3)2.4H2O200143.9Na2SO4200100KCl6540KNO382NaH2PO4.2H2O18.610.6MgSO4.7H2O740368.5MnSO4.4H2O4.53.35FeC6H5O7.3H2O4.2.25ZnSO4.7H2O2.71.34H3BO31.50.75KI0.80.38CuSO4.5H2O0.0040.002MoO30.020.01甘氨酸34烟酸0.50.75维生素B10.10.1维生素B60.10.1蔗糖2000015000Ph5.55.2四、

5、影响离体根生长的因素1、基因型不同植物的根对培养的反应不同，番茄、烟草、马铃薯、小麦可快速生长并继代培养无限生长。萝卜、豌豆需长时间且有限。木本植物很难生长。2、营养条件硝酸盐是最好氮源，蔗糖是最好碳源，铁、锰、硼、硫、维生素不能缺少。3、激素生长素对不同植物反应不同4、pH5、光照和温度25-27℃第二节茎尖培养一、概念和意义1、茎尖培养概念茎尖分生组织培养：指对不超过0.1mm的茎尖或几十微米的茎尖进行的培养。特点：可获无病毒苗，操作困难，成苗时间长。普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易成活、成苗时间短、繁殖速度快。2、茎尖培养

6、意义茎尖培养在园艺植物离体培养中最常见，可快速繁殖无性系、培养无病毒苗、品种改良。二、茎尖培养一般方法（一）材料的制备健壮枝梢-去除叶片-分成1-2cm-自来水冲洗消毒-75%的酒精30秒-0.1%升汞或20倍次氯酸钠消毒8-10min-无菌水-修剪剥离茎尖，通常切割下顶端0.1-0.1叶原基的茎尖-（无菌水）-接种。（二）培养基多为MS培养基及其改良配方，还有White配方、B5配方、Heller配方、Gautheret配方等。（三）培养方法1、固体培养法特点：琼脂做凝固剂，茎尖基部紧贴培养基。优点：操作较为简单，普遍。缺点：对有些植物培养较难。操作：培养基分装——灭菌

7、——冷却——茎尖接种——25+3℃培养。2、纸桥培养法滤纸取代琼脂，液体培养基。优点：营养物质能均衡持久地供给外植体，利于外植体健康生长。缺点：操作复杂。三、普通茎尖培养与繁殖技术茎尖培养可进行植物的无性快繁，并且技术较为成熟，也叫微繁技术。（一）茎尖微繁技术的一般方法1、无菌培养体系的建立外植体制备：正在生长的芽或腋芽、茎段、鳞茎切块、块茎、球茎。茎尖组织大小为带2-4个叶原基或更多。操作程序：类似一般无菌操作基本技术培养基：MS、B5、White等，糖2-3%，生长调节剂。培养条件：1000-3000Lx、16h、25℃。