人毛细淋巴管内皮细胞的分离、培养与鉴定

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1、万方数据．196．塞旦塑兰整墨查丝!!!!旦笙踅羔堕i塑型堑生型竺塑型鱼竺竺堕!!竺丝型：丝：竺：!文章编号：1003—6946(2010)03—196—03人毛细淋巴管内皮细胞的分离、培养与鉴定王玲，梁志清，李宇迪(第三军医大学附属西南医院。重庆400038)【摘要】目的：分离培养人皮肤毛细淋巴管内皮细胞(LEcs)，为进一步研究淋巴管生成在肿瘤转移扩散中的作用奠定基础。方法：采用胶原酶消化皮肤组织，血管内皮生长因子受体-3(VEG-FR-3)免疫微珠进行细胞分选，克隆柱纯化细胞。显微镜观察细胞形态及结构，免疫荧光检测细胞标志物表达。测定细胞生长曲线及VEGF．C蛋白对细

2、胞生长的影响。结果：光镜下LECs呈卵圆形单层生长，有典型铺路石征；电镜下可见细胞核大，胞浆丰富，内有空泡，细胞器丰富；LECs标志物VEFGR．3、淋巴管内皮细胞透明质酸受体．1(LYVE-1)、肾小球上皮细胞整合膜蛋白(Po—doplanin)、IY240均为阳性表达，血管内皮细胞(BVECs)标志物VIII因子表达阴性；VEGF—C对LECs的促增殖作用明显。结论：联合使用酶消、抗体磁珠分选和细胞克隆柱纯化法，可以成功分离获得人毛细淋巴管内皮细胞。【关键词】人毛细淋巴管内皮细胞；分离；培养；鉴定中图分类号：R711文献标识码：AIsolation。Cultureand

3、CharacterizationofEndotheliaICellsfromCapillaryLymphanticVesselsofHumanSkinWANGLing，LIANGZhiqing。LIYudi(SouthwestHospital。ThirdMilitaryMedicalUniversity．Chongqing400038。China)Correspondingauthor：LIANGZhiqing【Abstract】Objective：Humancapillarylymphaticendothelialcells(LECs)wereisolatedandcul

4、turedtoassistfurtherinvestigationofthefunctionoflymphaticvesselsgenerationdunngcancermetastasis．Methods：Humanskinwasdigestedbytypefcollagenase．CellswereisolatedusingmagneticbeadswhichweremarkedbymonoclonalantibodiesagainsttheextracellulardomainofVEGFR-3．andpurifiedbycloningcol-umn．Themorph

5、ologyandstructureofcellswereobservedbymicroscopy．ImmunophenotypeWasidentifiedbVimmunofluorescence．CellgrowthcurvewasrecordedtomeasuretheeffectofVEGF—Cprotein．Results：LECsexhibitedthetypicalcobblestonemorphologyasmonolayergrowthpaffemundermicroscopy．Enlargednucleusandrichcytoplasmwithbubble

6、swerefoundunderelectromicroscopy．LECsspecificmarkersinclu-dingVEGFR-3。LYVE一1．PodoplaninandD2-40allwerepositive．VIIIfactoraSspecificmarkerofbloodyes-selendotheliumcells(BVECs)Wasnegative．VEGF-Cinducedamarkedincreaseofcellproliferation．Con-cluslon$：HumandermalLECscouldbeharvestedsuccessfully

7、usingcollagenasedigestion。immunomagnet-icbeadssortingandcloniccolumnpurification．【Keywords】HumanlymphcapillaryEndothelialCells；Isolation；Culture；Characterizati∞近年来研究发现淋巴借是肿瘤浸润转移的重要通路。其作用主要是引流肿瘤来源的淋巴液和肿瘤细胞经淋巴管转移和浸润，同时还可能给肿瘤提供养料和氧气促进或维持肿瘤细胞的生长。而淋巴管内皮细胞(1ymphatic