《液相色谱分析》PPT课件

《《液相色谱分析》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、高效液相色谱法：特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。高压：150-350*105Pa高效：大于30000塔板/米高灵敏：10-9g（紫外检测）、10-11g（荧光检测）第三章高效液相色谱分析法HPLC（HighPertormanceLiquidChromatography，）§2-1高效液相色谱法的特点一、HPLC与GC差别1．分析对象的区别GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差

2、、离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测占有机物的20%HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括有机介质溶液），不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%2．流动相差别的区别GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用。HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用，当选用不同比例的两种或两种以上液

3、体作为流动相也可以增大分离选择性。3．操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）2．高压泵（输液泵）3．进样装置4．色谱柱——分离5．检测器——分析6．废液出口或组分收集器7．记录装置二、高效液相色谱仪流程图三、HPLC的特点和实际应用1、利用其高柱效（n=104片/米），有效分离极复杂体系中的痕量组分。正相色谱分离有机溶剂中的物质反相色谱分离水溶液中的物质----生化物质。2、用离子型固定相建立的离子交换色谱和离子对色谱法分析离子型体的含量。（蛋白质、氨基酸、常见阴阳离子等）3、

4、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分离高分子化合物。4、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化合物。§2-2基本理论和条件选择基础理论热力学理论：塔板理论——平衡理论动力学理论：速率理论——Vander方程一、塔板理论1.二、速率理论（与GC对比）2）涡流扩散项及其影响2.讨论：1）流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比）3）传质阻抗项及其影响1．三、影响分离的因素1.固定相与装柱方法的选择：选粒径小的、分布均匀的球形固定相（dp≤10μm）首选化学键合相，匀浆法装柱2.流动相及其流速的选择：选粘度小、低流速的流动相——甲醇，约1ml/

5、min3.柱温的选择：选室温250C左右四、HPLC法中分离条件的选择一、液固吸附色谱法（LSC）(liquid-solidadsorptionchromatography)二、液液分配色谱法（LLC）(liquid-liquidpartitionchromatography,chemicalbondedphasechromatography三、离子色谱法（IC）（ion-exchangechromatographyandionpairchromatography)四、空间排阻色谱法（SEC）（stericexclusionchromatogr

6、aphy§2-3各类高效液相色谱法简介1．分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异分离前提：K不等或k不等一、液固吸附色谱法（LSC）流动相为液体，固定相为固体吸附剂2．固定相：与LC比，固定相粒径不同（<10μm）（2）高分子多孔小球：YSG原理：吸附+分配蒹小孔凝胶作用特点：柱选择性好，峰形好，柱效低适用：分离弱极性化合物（1）硅胶表孔硅胶（薄壳硅胶）全多孔硅胶无定形YWG5~6μm5×104球形YQG3~4μm8×108堆积硅珠YQG3~4μm8×108理想原理：吸附特点：峰易拖尾适用：分离极性化合物3．流动相：底剂（

7、烷烃）+有机极性调节剂例：正己烷或庚烷+氯仿---4．影响k的因素：与固定相性质和流动相性质有关溶质分子极性↑，洗脱能力↓，k↑，tR↑溶剂系统极性↑，洗脱能力↑，k↓，tR↓注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间5．出柱顺序：强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱6．硅胶吸水量↑，LSC→LLC硅胶含水量较小吸附色谱硅胶极性较大硅胶含水量>17%分配色谱硅胶失活→载体吸附的水→固定液1．分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异2．固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）缺点：系统内部压力大，易流失，不实用固定液——极性→NLLC固定液——非极性→

8、RLLC3．正相色谱——固定液极性>流动相极性（NLLC）极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱适于分离极性组分反相色谱——固定液极性<流动相极性（R