微生物的培养与应用1

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1、课题1微生物的实验室培养了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。一、课题目标：掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：三、技能目标：课题1微生物的实验室培养基本操作程序1、培养基的配制2、培养基、器具的灭菌3、倒平板4、微生物的接种5、微生物的培养6、菌种的保存一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养㈠培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基。一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长

2、对pH、特殊营养物质，如：生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等要求。培养基的基本成分液体培养基：培养基的种类1.按物理状态分固体培养基：2.按原料来源分合成培养基天然培养基半天然培养基3.按用途分选择培养基鉴别培养基加富培养基㈠培养基在液体培养基的基础上再添加琼脂。半固体培养基：增菌纯化，增菌动力检测，保种㈡无菌技术无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。消毒：无菌技术的种类灭菌：使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的

3、微生物。将培养皿、接种用具进行灭菌；使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒；㈡无菌技术接种的过程要在酒精灯附近进行。单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒低效消毒法超声波、碘类、醇类、酚类杀灭除芽孢外的致病微生物中效消毒法紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等杀灭一切致病微生物高效消毒法物理法：热力、辐射、微波、等离子体杀灭一切微生物灭菌法方法定义分类化学法：醛类、烷化剂常用的消毒与灭菌的方法㈡无菌技术1.灼烧灭菌：常用的消毒与灭菌的方法2.干热灭菌：3.高压蒸汽灭菌：接种用具和接种过

4、程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的燃烧层中进行充分灼烧灭菌。将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160～170℃中加热1～2h即可。将需灭菌物品放到盛有水的高压灭菌锅内煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压达100kPa，温度达121℃后，维持15～30min即可。㈡无菌技术二、实验操作㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方物质牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水重量5g10g5g20g定溶至100mL2.称量按比例称取各种物质。注意：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。3.

5、溶化：4.灭菌：5.倒平板：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加水定溶至100mL。将配制好培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（3～5套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。待培养基冷却到50℃左右时倒平板。倒平板操作的讨论1.培养基灭菌后要冷却到50℃时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。通过灼

6、烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。倒平板操作的讨论㈡纯化大肠杆菌微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。1.平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分

7、散到培养基的表面。在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；平板划线法的讨论每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后仍然要灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作