微生物的生长及外界因素的影响

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1、第七章微生物的生长及外界因素的影响微生物的生长与环境条件的关系极为密切。只有当外界供给适当的营养物质，并满足微生物对各种物理、化学因子的要求之后，微生物才能正常生长。如果外界环境条件不适宜，则可以抑制微生物生长，甚至引起死亡。第七章微生物的生长及外界因素的影响一、无菌技术用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物；在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染；第一节纯培养微生物群体的生长从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研究和利用微生物的第一步。常用的器具：试管、瓶子、培养皿等1、微生物培养的常用器具及其灭菌高温干热灭菌常用的灭菌方法：高压蒸汽灭

2、菌2、接种操作火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行无菌操作：在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行二、获得纯培养的方法微生物在自然界中不仅分布很广，而且都是混杂地生活在一起。像土壤就是微生物的大本营，哪怕是一粒砂或一克土中，常生长着多种细菌及其他微生物。要想研究或利用某一微生物，必须把混杂的微生物类群分离开来，以得到只含一种微生物的培养。纯培培养:微生物学中将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称纯培培养。纯培养技术是进行微生物学研究的基础！纯培养的分离，是研究和利用微生物的第一步，是微生物工作中最重要的环节之一。最常用的方法稀释分离法(平板分离

3、法)稀释平板分离法单细胞挑取法选择培养基分离法等平板划线法涂布平板法三、微生物生长量的测定生长:微生物在适应条件下，不断地吸收营养物质，组成各种细胞物质，这种重量与体积迅速增加，就是微生物的生长。繁殖:当微生物的细胞生长到一定阶段，母细胞开始分裂，产生子细胞，个体大量增加，这就是繁殖发育:这个从生长到繁殖是由量变到质变的过程就是发育。在微生物学中提到的“生长”，一般均指群体生长，这一点与研究大生物时有所不同。各种微生物，由于有不同的形态和结构，发育过程中的生长，表现出的现象也不同。微生物的生长量可以根据菌体细胞数量，菌体体积或重量作直接测定，也可以用

4、某种细胞物质的含量或某个代谢活动的强度作间接测定。（一）细胞的数量测定1、细胞总数测定包括死活细胞测定，不详讲，留在实验课中详细讨论。方法计数器直接测定（血球计数板计数法）涂片染色法比浊法2、活菌数测定测定具有繁殖能力的单细胞微生物数量。方法平板菌落计数；最大概率法(MPN)膜过滤法(浓缩法)当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器，然后将膜转到相应的培养基上进行培养，对形成的菌落进行统计。（二）细胞生物量测定1、干重法取定容培养物，用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离出来，洗净、烘干、称重，求得培养物中的细胞的重量

5、，作为生长量的指标。真菌生长量的测定常采用干重法，将培养液中的振荡培养物过滤，收集菌丝，洗净，或在洋菜平板培养基上培养的菌体经短时间高温待洋菜溶化后滤出菌丝。洗净的菌丝，烘干后，测干重。2、蛋白质测定法细胞的含蛋白质量是比较稳定的，可以从蛋白质量的测定求出细胞物质量，或者以测定芳香氨基酸量求蛋白质量，可以测定含全氮量来求蛋白质量（蛋白质量=氮量x6.25）。3、DNA测定法DNA与DABA—2HCl（即新鲜配制的20%W/W、3.5—二氨基苯甲酸—盐酸溶液）显示特殊的荧光反应定容培养物的菌体悬液，应用这种荧光反应强度，求得DNA含量，可以反映所含的细

6、胞物质量。也可以根据DNA含量计算出细菌数量，每个细菌平均8.4×10-5ugDNA三、细菌的生长曲线在纯培养条件下，微生物生长的一般规律是：开始缓慢，逐渐加快，到达最高阶段后，又逐步下降，直至衰老死亡；表现出一个曲线式的发展过程。生长曲线—单细胞微生物（指细菌），接种到适应的新鲜液体培养基中，定期的测定细胞数目，以培养时间为横座标，以细菌对数为纵座标，划出的曲线，称为生长曲线。生长曲线①延迟期适应期②对数生长期③稳定期（最高平衡期）④衰亡期三、细菌的生长曲线（一）延迟期菌种初接入到新鲜的培养液中，并不立即生长繁殖，而需要通过自身生理机能的调节以逐步

7、适应新鲜的环境，因而在这段时间，细胞数几乎不增加，群体的生长率接近于零，曲线平缓。滞留期的适应时间长短，因菌种和培养条件而有差异，自几分钟到几个小时不等。（二）对数生长期是微生物细胞生理最活跃的时期，在这个时期，微生物细胞繁殖数目最多，所繁殖的时间也最短，细胞数目增加（2，4，6，8，16，32，64……），以2n增加的（注：n表示繁殖的次数）。但微生物不能以对数生长速度一直的繁殖下去，为什么呢？因为营养物质的不足，代谢物的积累和环境条件的变化（PH、氧化还原电位、温度等不适应微生物生长），因而生长繁殖速度缓慢降下来，而达到最高生长期。（三）稳定期细

8、胞分裂时间开始延长，曲线上升缓慢，以后部分细胞停止分裂，少数细胞开始死亡，使新细胞的增加和老细胞的死亡渐趋平