《钙镁磷的测定》PPT课件

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1、实验血清钙、镁、磷的测定西安医学院检验教研室（一）血清钙测定西安医学院检验教研室血浆钙的存在形式血钙可扩散钙非扩散钙离子钙可溶性不解离的钙盐占血浆总钙60%，能透过毛细血管壁与血浆蛋白结合，占血浆总钙40%，不能透过毛细血管壁血浆中直接发挥生理作用的钙相关知识血钙的测定包括总钙测定和离子钙测定法。总钙测定方法包括同位素稀释质谱法--决定性方法，原子吸收光谱法(AAS)–参考方法、分光光度法和络合滴定法等。分光光度法中以邻甲酚酞络合酮法（OCPC）、甲基百里香酚蓝比色法和偶氮胂Ⅲ比色法（ArsenazoⅢcolorimetry）最常用。离子钙测定目前临床最常用离子选择电极法。血清总钙测定邻甲

2、酚酞络合酮比色法西安医学院检验教研室掌握：OCPC法测定血清总钙的基本原理及提高准确性的方法。熟悉：血清总钙测定的注意事项。了解：总钙与离子钙的关系实验目的邻甲酚酞络合铜是金属络合染料，同时也是酸碱指示剂，在碱性条件下与钙络合，生成紫红色络合物。在600nm处有特征吸收，用8-羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰，与同样处理的的钙标准液比较即可测得出血钙含量。原理试剂与器材1.R1：乙醇胺缓冲液。2.R2：OCPC、8-羟基喹啉3.氯化钙标准液：2.50mmol/L工作液：取R1和R2等量混合即为工作液。4.分光光度计操作步骤取试管3支，按下表操作。加入物（ml）空白管标准管测定管工作液3.0

3、3.03.0蒸馏水0.06－－标准品－0.06－血清－－0.06充分混匀，37℃水浴5分钟，在波长600nm处，以空白管调零，读取吸光度值。计算参考范围：2.03～2.54mmol/L①用血清或肝素抗凝血浆；不能用钙的螯合剂及草酸盐做抗凝剂的标本；胆红素可产生负干扰，可用血清对照消除。②镁离子也可与OCPC试剂产生紫红色络合物，因此，试剂中加入8-羟基喹啉是起络合镁离子的作用，以消除镁离子的干扰。注意事项③pH对OCPC试剂的显色有很大影响，pH10.5~12时，反应的敏感性最好，所以选用pH11.0为宜。④此法对钙离子有很高的敏感性，测定器皿要洁净，所有试剂应在聚乙烯瓶内保存；且配制试剂

4、最好用高质量的去离子水或重蒸馏水。临床意义血钙增高常见于下列疾病：甲状旁腺机能亢进症、代谢性酸中毒、维生素D增多症、多发性骨髓瘤、恶性肿瘤等。血钙降低见于下列疾病：甲状旁腺机能减退、慢性肾炎尿毒症、佝偻病和软骨病、大量输入柠檬酸盐抗凝血等。西安医学院检验教研室（二）血清镁测定镁是人体内含量占第四位的金属元素，50%以磷酸盐、碳酸盐、氟化物的形式存在于骨骼中，45%在细胞内液，细胞外液中仅占5%。血清中镁55%为离子型，15%与磷酸盐、枸椽酸盐等形成复合物，30%与蛋白结合。相关知识镁测定的参考方法是原子吸收分光光度法，国内外多数实验室采用金属显色染料直接显色和比色分析，其中甲基麝香草酚蓝、

5、钙镁试剂广泛应用于镁的自动分析或手工操作。血清镁测定—钙镁试剂比色法西安医学院检验教研室掌握：钙镁试剂比色法测定血清镁的基本原理。熟悉：有关试剂在反应中的作用。了解：本法检测过程中的注意事项及血镁检测的临床意义。实验目的血清中镁在碱性环境中与Calmagite染料生成紫红色络合物，颜色的深浅与镁的浓度成正比。与同样处理的标准品比较，可求得镁的含量。溶液中加入EGTA可消除钙的干扰，使用表面活性剂可使蛋白胶体稳定，不必去除蛋白质而直接测定镁。原理试剂与器材1．R1：氢氧化钾、表面活性剂。2.R2：Calmagite、EGTA3.氯化镁标准液：1.0mmol/L工作液：取R1和R2等量混合即为

6、工作液。4.分光光度计操作步骤取试管3支，按下表操作。加入物（ml）空白管标准管测定管工作液3.03.03.0蒸馏水0.03－－标准品－0.03－血清－－0.03充分混匀，室温放置3分钟，在波长546nm处，以空白管调零，读取吸光度值。计算参考范围：0.7～1.2mmol/L1.溶血标本对本测定有明显的正干扰；脂血标本应去脂处理后，方可测定。2.试剂宜置于塑料瓶中保存。显色剂已褪色则不可使用。3.试剂防止污染，如自来水、器皿清洗不洁、试剂交叉污染等。4.溶液中的EGTA可消除钙的干扰；表面活性剂则可消除蛋白质的干扰。5.适合于手工操作及大多数自动化分析仪注意事项临床意义血清镁增高：服用治疗

7、剂过量、肾脏疾病、内分泌疾病（甲状腺机能减退等）、多发性骨髓瘤等。血清镁降低：镁摄入减少、镁由消化道丢失、镁由尿路丢失、内分泌疾病（甲亢、醛固酮增多症等）等。西安医学院检验教研室（三）血清磷测定血清中的无机磷主要有H2PO4-和HPO42-两种磷酸盐阴离子。由于这两种阴离子在不同的pH环境中能快速相互转换，因而不能确切的说出无机磷酸盐的分子量。目前常用的测定无机磷的方法有磷钼酸还原法、染料结合法、紫外分光光度法、黄嘌呤氧