分子生物组(PCR)检测程序性能验证标准操作程序

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1、Logo/×××××医院检验科×××laboratory/lab标题：分子生物组检测程序性能验证标准操作程序文件编号:HBHTCM/LH-SOP-PCR-××版本号：×修改号：0生效日期：××××-××-××发行部门：PCR组编制人：×××审核人：×××批准人：×××页码：第4页/共4页1目的确立分子生物组检测程序性能验证标准操作规程，使检测程序性能验证操作规范化。2适用范围采用基因扩增检验方法检测的所有项目。3职责或责任人3.1组长负责组织本组工作人员具体实施，并审核报告；3.2本组工作人员负

2、责对适用范围内的检测程序进行验证操作，并撰写报告；3.3技术主管负责监督本规程的实施；3.4质量主管参与对检验程序有效性的评价及指导；3.5检验科主任负责批准检测程序的实施。4内容定量检测方法和程序的分析性能验证内容至少应包括精密度、正确度、线性、测量和/或可报告范围、抗干扰能力等。定性检测项目验证内容至少应包括测定下限、特异性、准确度（方法学比较或与金标准比较）、抗干扰能力等。4.1正确度指该检测程序测定的结果与真实值或参考值接近的程度。4.1.1验证方法：本组采用对照试验，将卫计委临床检验中

3、心或湖北省临床检验中心的能力验证/室间质评的质控品、或已获认可的实验室的标本作为样品，以所用的检测程序对进行定量分析，分析结果与质控品靶值或比对实验室检测值进行比较，误差在可接受范围即可接受。4.1.2样品数量：至少5份，包括正常和异常水平或不同常见基因突变型；4.1.3频率：至少每年2次；4.1.4判定标准：对于定性试验，阴阳性应该一致；对于定量试验，应有≥80%的结果符合要求，卫计委临床检验中心能力和湖北省临床检验中心验证评价界限靶值分别为0.4和0.5，实验室间结果比对合格标准是偏倚<±7

4、.5%。4.2特异性指在可能其它成分（如其他病原体、内源物质等）存在的条件下，采用的方法能正确测定待测物的特性。对于核酸检测的特异性，主要是指核酸扩增过程中的特异性。4.2.1验证方法：取一份阴性标本，加入其他常见病原体高浓度核酸样本，进行10次独立的检测。4.2.2判断标准：观察并记录检测结果为阴阳性的差异。4.3精密度Logo/×××××医院检验科×××laboratory/lab标题：分子生物组检测程序性能验证标准操作程序文件编号:HBHTCM/LH-SOP-PCR-××版本号：×修改号：

5、0生效日期：××××-××-××发行部门：PCR组编制人：×××审核人：×××批准人：×××页码：第4页/共4页指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般以偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。1.1.1验证方法1.1.1.1重复精密度（批内精密度）：选择具有医学决定水平的高低值标本，按规定的操作方法，在较短得时间内及稳定的条件下各作20次独立测定。计算其均值、标准差与变异系数。标本可用患者血清或选用质控品进行，所检测所有数据超出2SD的数据不能超过2个，否则应

6、分析失控原因纠正后重新进行试验。（可参照厂家说明书）1.1.1.2中间精密度（批间精密度）：选择室内质控作为衡量中间精密度的依据。选取至少2个月的质控数据（浓度最好为医学决定水平之内和之外）计算均值、标准差与变异系数。1.1.1.3重复精密度（批内精密度）与中间精密度（批间精密度）：连续测定5d，每天一个分析批，每批高低两个浓度水平，每一个浓度水平同一样品重复测定3次。如果因为质量控制程序或操作问题判断一批为失控，应剔除数据，并增加执行一个分析批；正常使用每日质控品。计算批内和批间标准差。1.1

7、.2判定标准：批内精密度CV%应小于3/5总允许误差（TEa）；批间精密度CV%应小于4/5总允许误差（TEa）；如果批内精密度、批间精密度小于允许范围的，验证通过；如果批内精密度、批间精密度大于验证值，精密度验证未通过，重新验证或与厂家联系并取得帮助。1.2检出限是限度试验的参数，指试样中被测物能被检测出的最低量。定量分析的检出限必须经过分析适量的在检出限附近的样品或分析按检出限条件配制的样品的方法进行验证。1.2.1验证方法：选定一份浓度接近制造商声明的检出限的样本，或采用高值样本用阴性血清

8、进行稀释，进行20次独立测定。1.2.2判断标准：阳性率应≥95%，符合要求。1.3定量限指样品中被测物能被定量测定的最低值，其结果应具有一定的准确度和精密度。定量分析的定量限必须经过分析适量的在定量限附近的样品或分析按定量限条件配制的样品的方法进行验证。1.3.1验证方法：选定一份浓度在线性范围下限左右的样本，或采用高值样本用阴性血清进行稀释，进行20次独立测定。Logo/×××××医院检验科×××laboratory/lab标题：分子生物组检测程序性能验证标准操作程序文件编号:HBHTCM/