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《分子生物组(PCR)检测程序性能验证标准操作程序.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、1目得确立分子生物组检测程序性能验证标准操作规程,使检测程序性能验证操作规范化、2适用范围采用基因扩增检验方法检测得所有项目。3职责或责任人3.1组长负责组织本组工作人员具体实施,并审核报告;3.2本组工作人员负责对适用范围内得检测程序进行验证操作,并撰写报告;3.3技术主管负责监督本规程得实施;3.4质量主管参与对检验程序有效性得评价及指导;3.5检验科主任负责批准检测程序得实施。4内容定量检测方法与程序得分析性能验证内容至少应包括精密度、正确度、线性、测量与/或可报告范围、抗干扰能力等、定性检测项目验证内容至少应包括测定下限、特异性、准确度(方法学比较或与金标准比较)、抗干扰能力等。4.1
2、正确度指该检测程序测定得结果与真实值或参考值接近得程度。4.1.1验证方法:本组采用对照试验,将卫计委临床检验中心或湖北省临床检验中心得能力验证／室间质评得质控品、或已获认可得实验室得标本作为样品,以所用得检测程序对进行定量分析,分析结果与质控品靶值或比对实验室检测值进行比较,误差在可接受范围即可接受。4.1.2样品数量:至少5份,包括正常与异常水平或不同常见基因突变型;4.1.3频率:至少每年2次;4.1.4判定标准:对于定性试验,阴阳性应该一致;对于定量试验,应有≥80%得结果符合要求,卫计委临床检验中心能力与湖北省临床检验中心验证评价界限靶值分别为0。4与０.5,实验室间结果比对合格标准
3、就是偏倚〈±7.5%。4.2特异性指在可能其它成分(如其她病原体、内源物质等)存在得条件下,采用得方法能正确测定待测物得特性、对于核酸检测得特异性,主要就是指核酸扩增过程中得特异性。4.2.1验证方法:取一份阴性标本,加入其她常见病原体高浓度核酸样本,进行10次独立得检测、4.2.2判断标准:观察并记录检测结果为阴阳性得差异。4.3精密度指在规定得测试条件下,同一个均匀样品,经多次取样测定所得结果之间得接近程度。一般以偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。4.3.1验证方法4.3.1.1重复精密度(批内精密度):选择具有医学决定水平得高低值标本,按规定得操作方法,在较短得时间内及稳定得条件下各作2
4、０次独立测定。计算其均值、标准差与变异系数。标本可用患者血清或选用质控品进行,所检测所有数据超出2ＳD得数据不能超过2个,否则应分析失控原因纠正后重新进行试验。(可参照厂家说明书)4.3.1.2中间精密度(批间精密度):选择室内质控作为衡量中间精密度得依据。选取至少2个月得质控数据(浓度最好为医学决定水平之内与之外)计算均值、标准差与变异系数。4.3.1.3重复精密度(批内精密度)与中间精密度(批间精密度):连续测定5d,每天一个分析批,每批高低两个浓度水平,每一个浓度水平同一样品重复测定3次。如果因为质量控制程序或操作问题判断一批为失控,应剔除数据,并增加执行一个分析批;正常使用每日质控品。
5、计算批内与批间标准差。4.3.2判定标准:批内精密度CV％应小于3/５总允许误差(TEa);批间精密度CV％应小于4/５总允许误差(TEａ);如果批内精密度、批间精密度小于允许范围得,验证通过;如果批内精密度、批间精密度大于验证值,精密度验证未通过,重新验证或与厂家联系并取得帮助。4.4检出限就是限度试验得参数,指试样中被测物能被检测出得最低量。定量分析得检出限必须经过分析适量得在检出限附近得样品或分析按检出限条件配制得样品得方法进行验证、4.4.1验证方法:选定一份浓度接近制造商声明得检出限得样本,或采用高值样本用阴性血清进行稀释,进行20次独立测定、4.4.2判断标准:阳性率应≥9５％,符
6、合要求、4.5定量限指样品中被测物能被定量测定得最低值,其结果应具有一定得准确度与精密度。定量分析得定量限必须经过分析适量得在定量限附近得样品或分析按定量限条件配制得样品得方法进行验证。4.5.1验证方法:选定一份浓度在线性范围下限左右得样本,或采用高值样本用阴性血清进行稀释,进行20次独立测定。4.5.2判断标准:分析检测结果得SD值<0、2４,符合要求。4.6线性与测量/可报告范围:线性指在检测范围内,测试结果与被测物浓度呈正比关系得程度。4.6.1验证方法:取评价项目得高、低值病人标本各一份,(高值标本为接近线性范围上限或略超过线性上限得标本,低值标本为检测阴性得标本)。用低值标本对高值
7、标本按１∶10得比例进行倍比稀释,配制成系列浓度梯度得血清,使检出限上得点至少不得少于5个。每个样本标本重复测定3次,记录结果、所有样品应在一次运行中或几次间隔很短得运行中随机测定,最好在一天之内完成。统计数据,剔除离群值,单个离群值可直接由数据组中剔除并进行重测,全部样本无需重新测定、如发现多个离群值或数据点过于分散,需检查造成此误差得可能原因,对可能原因进行纠正后,对全部样本进行重新测定、求出
