gg动物细胞培养和核移植技术

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1、动物细胞工程动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体技术动物细胞核移植动物细胞工程常用技术复习：植物细胞工程中常用的技术？植物组织培养和植物体细胞杂交其他动物细胞工程技术的基础如果一个大面积烧伤的病人，自体皮肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤？人耳鼠“人耳鼠”再出风头2001年，一只特别的活老鼠在北京引起轰动——这是有着一对红眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。值得一提的是，这只小白鼠的背上，竟长着一只几乎与身子一般大小的“人耳”。这只老鼠背上的“人耳”是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主

2、任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。在京展出的数天，尽管门票高达20元，但还是有将近20万人，心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠”的风采。人耳鼠的出现，透露了怎样的信息？动物细胞培养和核移植技术一、动物细胞培养动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖.细胞增殖2、原理1、概念3、过程：复习：植物组织培养在无菌和人工控制的条件下,将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工控制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。过程

3、幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础3、过程：剪碎的动物组织块细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。（分装前的细胞培养）（水解弹性纤维）4、动物细胞生长特性悬液

4、中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞贴壁：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。要求：接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。50代以后失去接触抑制接触抑制细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液遗传物质未改变遗传物质已改变剪碎的动物组织块传代培养的细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞

5、株：细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。动物胚胎或幼龄动物的组织或器官分裂旺盛，分化程度低，易培养P44思考1、用胰蛋白酶分散细胞，由此可说明细胞间的物质主要是什么成分？2、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？那将动物组织分散成单个细胞时要注意什么问题呢？3、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？主要是蛋白质(胶原蛋白等)。能，应注意时间的控制不能，因为动物细

6、胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，讨论以下问题：1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？5、动物细胞培养的条件P46【讨论】充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境。无菌、无毒的环境。1、无菌、无毒的环境2、营养（与体内基本相同）3、温度和PH4、气体环境：保证细胞顺利的生长增殖无菌处理、添加一定量的抗生素，定期更换培养液葡萄糖、氨基

7、酸、促生长因子、无机盐、微量元素、维生素、动物血清、血浆等。36.5+（-）0.5度,7.2~7.4O2:细胞代谢所必须CO2：主要维持培养液的PH（95%空气和5%CO2）5、动物细胞培养的条件合成培养基合成培养基成分已知，便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。天然培养基直接采用取自动物体液或从组织中提取的成分作培养液，主要有血清、组织提取液、

8、鸡胚汁等。使用最普遍的天然培养基是血清，基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及其多活性物质。与合成培养基合用，能使细胞顺利增殖生长。无血清培养基动物血清成分复杂，各种生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清对细胞生长很有效，但后期对培养产物的分离、提纯以及检测造会成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限，成