《基因工程的原理》ppt课件

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1、第一节基因工程的原理乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷)基因工程的概念基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境操作对象操作水平基本过程结果基因工程是指按照人们的愿望，将一种生物的基因在体外剪切，并与特殊的运载工具进行拼接，然后导入另一种生物体内进行扩增，并使之表达产生所需蛋白质的技术。定向的改造生物的遗传性状。DNA重组技术或基因拼接技术生物体外基因DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达定向的改造了生物的性状_________________的培育成功，宣告了基因工程的诞生。双重抗性大肠杆菌转基因

2、抗虫棉抗虫棉普通棉问题探讨：苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。想一想需要哪些工具呢？苏云金芽孢杆菌毒蛋白普通棉花　　抗虫棉一、基因手术刀：限制性内切酶二、基因缝纫针：DNA连接酶三、基因运输车：载体探究1：基因工程的基本工具是什么？（1）识别特定的脱氧核苷酸序列（回文序列）；（2）并在特异性位点把双链DNA分子“切割”开。主要从原核生物中分离纯化一、基因手术刀：限制性内切酶1、来源：2、功能：3、酶切结果：形成黏性末端。4、作用实质：

3、特定部位的磷酸二酯键（酶切位点）断开EcoRⅠ黏性末端黏性末端识别特定的脱氧核苷酸序列的特点：中轴线两侧的碱基反向对称重复排列的回文序列。切割的位点：G、A之间断裂的化学键是：磷酸二酯键限制性内切酶对DNA分子的切割AAGCTTTTCGAAAAGCTTTTCGAADNAABCDDNAHindⅢHindⅢ切割位点AB限制酶作用是A处还是B处？A处T1234512345A思考：某DNA分子被限制性内切酶Ⅰ切后形成1个DNA片段，有1000个碱基对，该DNA分子若被限制性内切酶Ⅱ切后形成2个DNA片段，分别有600

4、个碱基对和400个碱基对，若该DNA分子同时被限制性内切酶Ⅰ和Ⅱ切割后形成2种DNA片段，分别有600个碱基对和200个碱基对。问：该DNA分子有何特点？限制性内切酶Ⅰ有几个酶切位点？限制性内切酶Ⅱ有几个酶切位点？该DNA为环状1个2个GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGCTTAAAATTCG双链断开不同来源的DNA片段结合1、种类：E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶磷酸二酯键二、基因缝纫针：DNA连接酶2、作用部位：3、作用条件：两个DNA

5、分子末端的碱基互补配对。4、功能：将两个DNA分子“缝合”起来，恢复被限制性内切酶切开了的磷酸二酯键。可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键GCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCG二、基因缝纫针：DNA连接酶GCTTAAAATTCG二、基因缝纫针：DNA连接酶连接酶的部位：磷酸二酯键，不是氢键GCTTAAAATTCG磷酸二酯键磷酸二酯键重组DNA二、基因缝纫针：DNA连接酶DNA连接酶与DNA聚合酶比

6、较DNA聚合酶DNA连接酶相同不同作用对象模板形成磷酸二酯键单个脱氧核苷酸DNA片断需要不需要（1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；（2）具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；（3）具有某些标记基因，便于进筛选运载体是否进入受体细胞。（如荧光蛋白基因、抗四环素基因、抗氨苄青霉素基因）（4）对受体细胞无害质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等三、基因运输车：载体2、载体必须具备的条件：1、常用的载体有：常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有限制性内切酶切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的

7、培养基鉴别习题:已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因,现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么?请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论对照组：不添加抗生素实验组1：添加一定浓度的四环素实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素对照组实验组1实验组2实验组3结论预期一++++预期二++——预期三+—+—预期四+———既含有抗四环素基因也含有抗氨苄青霉素基因只含有抗四环素基因只含有抗氨苄青霉素基因既不含有抗四环素基因也不含有抗氨苄青霉素基因+：存活—：死

8、亡1、关于限制酶的说法中，正确的是（）A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNAD．限制酶只存在于原核生物中课堂巩固2、DNA连接酶催化的反应是()A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键B．黏性末端碱基之间形成氢键C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接D．A、B、C都不正确3、作为基因的运输工具——载