《生化实验技术》综合设计性大实验

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1、《生化实验技术》综合设计性大实验合作性学习实验实施流程及要求课堂理论学习：辅导相关生化大分子提取分离纯化基本知识项目发布：了解项目内容网上预约：理论自学——设计实验方案——网上递交——教师修改及审核——实验室项目实施——论文上交——教师批阅——评分实验分组：各自组合，最多不超过4人/组，推选组长，负责平时讨论、项目方案设计及材料收集实验实施要求：平时按各组计划时间分别进行实验，组长有义务指导下组相关实验内容，每次实验必须登记。全班交流：实验结束安排课堂讨论交流，每组准备一人汇报，一人记录；要求用PPT总结汇报项目实施、实验创新、疑难点，其他组学生质疑，教师点评。指导教师：汪财生、斯

2、越秀通过综合训练，能够系统掌握蛋白质、DNA制备的基本原理和操作，学习如何进行实验设计，掌握实验过程中的关键环节，对实验中出现的问题进行科学的分析；在学习实验技术的同时，自觉培养分析问题和解决问题能力。实验项目训练目标思考题（课前设疑）1.如何保持生化物质的生物活性？一般生化物质在碱性条件下容易变性，还是在酸性条件下容易变性？2.一般从天然生物材料制作生化物质的过程大体可分为几个阶段？3.在制备生化物质前应如何选择原料？4.什么叫动态吸附和静态吸附？它们在应用上有何区别？5.对酸性物质的提取，常在什么条件下进行？对碱性物质的提取，常在什么条件下进行？对两性物质的提取，常在什么条件下

3、进行？6.以血清球蛋白为例解释提取制备每步骤的基本原理？7.干燥离子交换剂应如何进行处理？何谓离子交换剂转型？8.动植物总DNA或RNA提取的方法主要有哪些？以猪脾脏DNA提取为例试述每步骤主要原理是什么？如何判断所提取DNA的纯度？9.蛋白质浓度测定方法有哪些？如何鉴定所提取蛋白的纯度？未知蛋白质分子量测定方法有哪些？07级生物技术实验安排11-14周生物技术072-073班实验14-16周生物技术071班实验15周生物技术072-073班上交论文及讨论材料等17周生物技术071班上交论文及讨论材料等第一部分生化物质的制备分析一般从天然生物材料制作生化物质的过程大体可分为六个阶段

4、：1.原料的选择和预处理2.原料的粉碎；3.提取，即从原料中经溶剂分离有效成分，制成粗品的工艺过程；4.纯化，即粗制品经盐析、有机溶剂沉淀、吸附、层析、透析、超离心、膜分离、结晶等步骤进行精制的工艺过程；利用生化制备技术从生物材料中获得特殊的生物活性物质，如蛋白质、酶、激素、核酸等生化产品时，通常要注意以下几个问题：6.成品及制剂，即半成品或原料药经精细加工制成片剂、口服液、针剂、冻干剂等供饮用或临床应用的各种剂型。5.干燥及保存；1．生物材料的组成成分非常复杂，有数百种甚至更多，各种化合物的形状、大小、相对分子质量和理化性质都各不相同，有的迄今还是未知物，而且这些化合物在分离时仍

5、在不断的代谢变化中。2．在生物材料中，有些化合物含量很低或极微，有的只有1／l0000，甚至更少。制备时，原材料用量很大，得到产品很少，与投料量相比“虎头蛇尾”。近年来，用所谓“钓鱼法”，利用某些分子特有的专一亲和力，将某一化合物从极复杂的体系中“钓”出来，与其他化学分离技术相比具有很大的优越性。3．许多生物活性物质，一旦离开了生物体内环境，很易变性及被破坏，应十分注意保护这些化合物生物的活性，常选择十分温和的条件，尽可能在较低温度和洁净环境中进行。一般来说制备的操作时间长、手续较繁琐。因为许多大分子在分离过程中，过酸、过碱、重金属离子、高温、剧烈的机械作用、强烈的辐射和机体内自身

6、酶的作用，均可破坏这些分子的结构或生理活性。4．生化分离制备过程几乎都在溶液中进行，各种温度、pH、离子强度等参数，对溶液中各种组成的综合影响，常常无法固定，有些实验或工艺的设计理论性不强，常带有很大的经验成分。因此，要建立重复性好的成熟工艺，对生物材料、各种试剂及其辅助材料等都要严格地加以规定。5．生化制备方法最后均一性的证明与化学上纯度的概念并不完全相同，这是由于生物分子对环境反应十分敏感，结构与功能的关系比较复杂，评定其均一性时，要通过不同角度测定，才能得出相对“均一性”结论，只凭一种方法所得纯度的结论，往往是片面的，甚至是错误的。原料选择和预处理选什么样的原材料应视生产目的

7、而定。一般要注意以下几个方面:1．要选择有效成分含量高的新鲜材料；2．来源丰富易得；3．制造工艺简单易行；4．成本比较低；5．经济效果要好。如蛋白质原料的选择蛋白质类生化产品的原料来源有动植物组织和微生物等，原则是要选择富含所需蛋白质多肽成分的、易于获得和易于提取的无害生物材料。对天然蛋白质生化产品，为提高其质量、产量和降低生产成本，对原料的种属、发育阶段、生物状态、来源、解剖部位、生物技术产品的宿主菌或细胞都有一定的要求，了解这些，可使分离纯化工作事半功倍，反之则收