时间分辨荧光技术原理及应用

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1、免疫学基本原理时间分辨荧光免疫原理晁建文博圣内部培训免疫学基础抗体结构和实际应用时间分辨原理免疫学的发展免疫后基因组时代，从功能基因入手，学是现今研究免疫应答与耐受的分子机理，人类新型疫苗的设计研制。与传染病1977年分子免疫发展斗争的过程中1957年细胞免疫发展发展起来的！1900年抗原、抗体被发现——免疫化学发展。1876年多种病原菌被发现——疫苗广泛应用抗原抗体的基本概念抗原（antigen,Ag)是指能够刺激机体产生免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生免疫效应的物质。抗体（antibody,Ab)是

2、B细胞识别抗原后增殖分化为桨细胞所产生的一种蛋白质，主要存在于血清等体液中，能与相应抗原特异性地结合，具有免疫功能。免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。免疫细胞免疫器官按其功能不同分为：中枢免疫器官：免疫细胞发生、分化和成熟的场所。包括：胸腺和骨髓(人和哺乳动物)；法式囊(禽类)。外周免疫器官及组织：1.B细胞成熟的场所；2.免疫应答的发生部位。包括：淋巴结脾脏粘膜伴随淋巴组织等。免疫细胞来源于骨髓细胞免疫应答的基本过程免疫应答是十分复杂的过程，此处列出两种基本的免疫应答抗原抗

3、体反应原理定义：是指抗原与相应抗体之间发生的特异性结合反应特异性比例性可逆性抗原抗体反应的三个特点免疫球蛋白的分子结构免疫球蛋白的基本结构四肽链结构，链间二硫键连接两条重链（H）和两条轻链（L）氨基端和羧基端。重链与轻链(1)根据重链分类：根据重链靠近羧基末端氨基酸组成及排列顺序不同，将重链分为种：γ、α、μ、δ、ε根据重链组成不同，将免疫球蛋白分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE(2)根据轻链分型：κ、λ型天然Ig分子中，重链同类，轻链同型免疫球蛋白分为五类可变区与恒定区根据氨基酸排列顺序的不同分为：可变区（

4、V）和恒定区（C）可变区（V区）：氨基酸组成、排列顺序变化较大恒定区（C区）：氨基酸数量、种类、排列顺序及含糖量都比较稳定超变区（HVR）框架区轻链：24-34、50-56、89-97重链：31-35、50-65、95-102铰链区位于CH1与CH2之间，含有丰富的脯氨酸，因此易伸展弯曲，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。J链和分泌片J链是一条多肽链，富含半胱氨酸，由浆细胞合成，以二硫键的形式共价结合到Ig的重链上。分泌片：由黏膜上皮细胞合成和分泌，以非共价形式结合到二聚体上，保护IgA，使之不受环境中酶的破坏，并介导IgA的

5、转运免疫球蛋白的功能区Ig的H链、L链每隔110个氨基酸即由链内二硫键连接形成一个能行使特定功能的球性单位，称为Ig的结构域或功能区（domain）。各功能区的作用VH和VL:识别和结合抗原CH1和CL:同种异型的遗传标志CH2:补体C1q结合位点，IgG可通过胎盘CH3/CH4:与多种细胞表面的FcR结合(免疫调理,I型超敏反应)单克隆抗体和多克隆抗体多克隆抗体：多个抗原决定基——机体——多种抗体的混合物单克隆抗体（monoclonalantibody,mAb）：由一个B细胞克隆产生的、针对某一特定抗原决定簇的高度特异性

6、抗体PcAbMcAb特异性低高敏感性差强单克隆抗体制备利用抗原抗体特异性的应用首先是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。几种常用的方法双抗体夹心法双位点一步法竞争法间接法(双抗原夹心法)捕获法测IgM抗体应用亲和素和生物素的方法捕获法测IgM抗体应用亲和素和生物素的方法钩状效应（hookeffect）定义：是指抗原过剩致一步法测

7、抗原出现假阴性的现象。在抗原抗体反应时，抗原抗体须在一定比例范围内才能出现最大凝集，当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，抗原过量或抗体过量都会导致两者胶联度降低，从而导致凝集程度与实际浓度不符，出现结果将低于实际含量，严重时甚至可出现假阴性结果。钩状效应在凝集曲线上表现为类似抛物线的形状。医学免疫学化诊断技术医学免疫学化诊断技术分为：同位素放射免疫非放射免疫分析吸收光谱法酶联ELSIA发射光谱法酶联化学发光直接化学发光电化学发光荧光偏振时间分辨主流化学发光介绍发

8、光免疫分析：是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术。化学发光（chemiluminescence）：是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂