藻类的实验室培养

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1、微藻的实验室培养学生：林晓生学号：2120180414导师：杨缜教授一、藻类的概述藻类是原生生物界一类真核生物(有些也为原核生物，如蓝藻门的藻类）。主要水生，无维管束，能进行光合作用。藻类植物共约为2100属,27000种。根据所含色素、细胞构造、生殖方法和生殖器官构造的不同，分为绿藻门、裸藻门、轮藻门、金藻门、黄藻门、硅藻门、甲藻门、蓝藻门、褐藻门和红藻门。色素的颜色划分，藻可分为3类：绿藻、褐藻和红藻。由于单胞藻具有利用太阳光能效率高、营养丰富、生长繁殖迅速、对环境的适应性强和容易培养等重要特性，因而受到重视。微藻是一类在陆地、海洋分布广泛，营养丰富、光合利用度高的自养植物，细胞代谢产

2、生的多糖、蛋白质、色素等，使其在食品、医药、基因工程、液体燃料等领域具有很好的开发前景。二、微藻的营养模式和生长模式　　（二）、微藻的生长模式藻类在培养过程中，生长繁殖的速度，出现一定的起伏，这种生长模式可划分为五个时期（延缓期、指数生长期、相对生长下降期、静止期、死亡期）。　　　　三、培养按培养的场所分室内培养和室外培养1）按培养基的形态分固体培养和液体培养2）按培养的纯度分纯种培养和单种培养3）按藻液的流动情况分静止培养和循环流动水培养4）按气体交换情况分充气培养和不充气培养5）按藻液与外界接触程度分封闭式培养和开放式培养6）按培养规模和目的分小型培养、中继培养和大量培养方式简单介绍其

3、中的四种方式：（1）纯培养和单种培养纯培养（axenicculture）：是无菌培养，指排除了包括细菌在内的一切生物的条件下进行的培养。纯培养操作要求十分严格，要求有无菌室、超净台等设备，容器、工具、培养液等均须彻底灭菌。培养成功率很高，是进行科学研究不可缺少的技术。单种培养（single-speciesculture）：指区别于纯培养的不排除细菌存在的培养（可以是生产性的，也可以是非生产性的）（2）封闭式培养和开放式培养封闭式培养（closedculture）：指把培养液密封在透明的容器中，与外界空气隔离，暴露在阳光中，CO2完全采用人工供给的方法。各种反应器等开放式培养：指把藻类培养在

4、开敞容器中，如广口玻璃瓶、水族箱、玻璃钢水槽、水泥池等。封闭式塑料薄膜袋培养，方法简单，成本低、培养的藻细胞密度大，不易污染且生产周期短，效果很好。（3）小型培养、中继培养和大量培养小型培养：一级培养，目的是培养和供应藻种，用于科研等。一般采用封闭式不充气一次性培养方式，培养容器一般采用100～3000ml的三角烧瓶。中继培养：又称二级培养，目的是藻种扩大培养，供应生产性大量培养的藻种。一般在室内大的玻璃容器或塑料大袋中进行。大量培养：也叫三级培养，目的是为培养动物提供大量单胞藻饵料。有室内和室外两种。目前主要采取室内、开放式、通气、一次性或半连续培养法，培养容器有大型玻璃钢水槽、大型水泥

5、池或塑料薄膜袋等（也有用土池）。单胞藻生产性扩大培养常用流程500mL藻种5000mL三角烧瓶细口玻璃瓶 塑料桶封闭式塑料薄膜 水泥池一级培养二级培养三级培养四、实验室培养过程1.消毒2.配制培养液3.接种4.培养管理5.收获1容器、工具和水消毒方法总结一级培养（实验室的培养）：金属器具和试管口、瓶口：直接灼烧；玻璃器皿：洗液+烘箱；纸、棉花、纱布：烘箱；培养用水：砂滤水→脱脂棉→煮沸→冷却（洗液：15g重铬酸钾+200mg浓硫酸混匀）2.培养液和培养基的配方配方极多，每种配方主要适用于一定藻种，这里介绍比较常用的几种：水生4号和克诺普（Knop）培养液，一般用于绿藻；蓝藻可用朱氏10号或

6、水生105号无氮培养基（后者适于固氮蓝藻）；硅藻可用朱氏10号和水生硅1号培养基；另外还有海产绿藻、硅藻的培养基。常用培养基配方见表1。以上用水量都是加至1000mL，海藻培养液用海水，如无海水可用淡水1000mL加30克食盐代替。土壤抽出液用菜园土1份和水2份比例混合搅匀，静置，取上清液；海泥抽出液也可用同样比例制备。如配制固体培养基，可在培养液内加入1.5％琼脂。从以上各种配方，可看到配制藻类培养液的几条原则：（1）要有适量氮源（除固氮蓝藻外），如氨盐、硝酸盐、有机氮等。（2）应包括主要元素钾、磷、镁、硫、钙等。（3）要考虑各种盐类总浓度和pH是否适合藻类需要，可用碳酸氢钠调节pH。（

7、4）要加入各种藻类需要的微量元素，如铁、锰、铜、锌等（后几种包括在土壤抽出液中）。（5）要满足某些藻类特殊需要，如蓝藻需钼，硅藻需硅。（6）要添加适量生长物质如维生索B1、B2等（包括在土壤抽出液中）。3.藻种分离方法：常用下列四种。1）微吸管（毛细管）分离选直径较细（约5毫米）玻管，在火焰上加热，待快熔时，快速拉成口径极细的微吸管。将稀释适度藻液水样，置浅凹载玻片上，镜检。用微吸管挑选要分离的藻体，认真仔细地吸出，放入