关于HPLC的一些常见问题

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1、关于HPLC的一些常见问题1.HPLC应用范围及其作用；2.溶剂瓶；3.进样器；4.液相色谱柱；5.预柱（保护柱）；6.检测器；7.常用术语；8.仪器的日常维护。1.HPLC应用范围及其作用HPLC高压（0-40Mpa），高速（几分钟-小时），高灵敏度（10-8mg/ml）的特点，并且能适用于高沸点（>350℃），大分子（>1000），热稳定性差的各种组分分析，因此分析范围很广，可以对80%的有机物进行分离、分析工作。除化工外，它可用于农药，医药，生物化工等其它众多行业，近年来特别是在药物化学，生命科学中的DNA等的检测分离也得以广泛应用。另外，HPL

2、C的分析对样品不需要作预先处理，操作简便。总之，简单地来讲，使用HPLC来分析的主要目的在于分离一个混合物中各个组分，并定量出各组分在混合物中所占的比重。比如分析药物（如感冒药），就是要了解该药物中含有那些成分，起治疗效果的是其中的那些组分，这些组分的比重含量又是多少？通过HPLC的分析，就能取得这些数据资料，这对于药物的进一步改进与制备是相当重要的。也正是基于这些分析手段与数据，人们才能准确地从药物中提取有效的活性组分，以提高药效（如人参中提取人参皂苷）。2.溶剂瓶溶剂瓶是指用来贮放洗脱溶剂（流动相）的容器，大小一般有0.5、1.0、1.5、2.0L

3、。容器通常是玻璃或内表涂有聚四氟乙烯的不锈钢材料的。这些材料惰性好，化学性能稳定，适宜保证流动相组分的恒久、均一。国外有些特殊的溶剂瓶设有静电导出装置，更有利于操作安全与流动相的稳定。贮放于溶剂瓶中的溶剂必须是脱气的，即将溶解在溶剂内的微量空气从溶剂中排出。脱气的主要目的在于避免溶剂进入高压泵后，溶解的微量空气在柱后被减压放出形成气泡，从而严重影响到样品组分的检测与基线稳定，甚至分析系统无法正常工作（除溶须剂脱气外，系统其它地方也绝不允许有任何空气存在，否则将影响流量、柱压与样品分离以及检测）。溶剂脱气常用有三种方法（如下图），在国内常用超声脱气，效果

4、较后两者差，但经济实用，亦能取得较好的脱气效果。国外常用吹氦脱气与在线脱气，效果好，但费用昂贵。3.进样器进样器是一种将分析样品引进色谱柱（二相交互区）进行分离分析的装置。进样的种类主要有手动进样与自动进样两种。自动进样即将所有手动过程都机械化控制了，操作人员只须将大量的待测样品处理后装进分析样品瓶，按编号放入自动进样器的工作架中，然后启动液相色谱仪器或或工作站上的控制程序即可完成所有的分析工作。当然也能实现远程控制。自动进样器的优点显而易见，工作效率高，节省人力物力，分析结果准确、重现性好。但整套装置价格昂贵，国内用户一般很少使用，在此不作过多介绍，

5、详细参见相关书籍资料。自动进样器的基本工作步骤如下：控制器依据样品序号或指令，将某样品定位于进样针下方（或将进样针移位于某样品瓶的上方），插针、抽取样品、进样阀切换、进样（进样阀的另一通道始终与柱进样器相连接）。接下来可能是用清洗瓶中的溶剂冲洗针管后恢复到原始待进样状态，至此自动进样器完成了一个完整的工作过程。手动进样分为两类：针进样与阀进样。在这里，针进样指用针管吸进样品后插入柱前的进样头，将样品推进，完成进样。这种方式基本已淘汰，没有实用价值（主要是进样重复性差（进样量、进样时间），并且只能低柱压下进样，密封性也差），但其直接的柱头进样，减小了柱前

6、样品扩散，形成塞状（点状）进样，使得其拥有各类进样器中最高的分离柱效。它需要熟练的操作人员才能完成。手动进样的另一种方式就是阀进样，液谱系统中经常采用的进样阀是美国产的7725i阀件。这是一种平面六通阀，其取样、进样依靠阀通道位置的切换来完成，自动进样器中广泛使用的也是这类阀件。进样阀分为二块。一块是固定的平面，平面上分布着间隔六个固定孔位。其中1、4#孔位连接一根定量管（定量管是根有固定容积的空管子，用来定量移取样品，一般有10ul、20ul），2、3#孔位分别接有溶剂进出的管路，5#孔位为样品放空孔位或连接抽液泵，6#孔位是清洗或进样放空用的。另一

7、块则是能够相对转动一定角度（60°）的平面体，上面只有一个孔位，即在其1#位上有一个孔位与背面的进样针孔位始终连接（进样针穿透到此为止，不会送抵到固定块平面上），其余取而代之的是相应的二条（23#、45#）固定的沟槽。进样时将阀顺时针转动60°即可，此时12#、34#相连，溶剂流将定量管中的样品推送进色谱柱内。阀进样、自动进样由于能耐高压、可准确定量进样，使得样品进样的重复性可以做到非常优秀、完美。但在液谱系统的进样中，要求死体积要小（即乏至柱间的连接管路容积要尽可能短小），以便注入的样品能极快地到达分析柱头，确保样品为点状（塞状）中心进样。阀的材料一

8、般为耐酸碱腐蚀的并具良好惰性的聚四氟乙烯、陶瓷、PEEK（聚醚醚酮）等。好的进样装置在进样时引